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Crystallization and structural analysis of the human insulin receptor

人胰岛素受体的结晶和结构分析

基本信息

批准号：
15570099
负责人：
OBATA Toshiyuki
金额：
$ 2.37万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15570099/
关键词：
human insulin receptor αsubunits crystallization structural analysis

项目摘要

The human insulin receptor (hIR) is a glycoprotein composed of two α subunits (735 amino acid ; 135kDa) and two β subunits (620 amino acid ; 95kDa) derived by proteolytic processing from a single polypeptide (Cell, 1985, Ebina et al.). The hIR forms a disulfide-linked heterotetramer (β-α-α-β). The extracellular region of the receptor consists of the entire α subunit and a portion of the β subunit external to the predicted transmembrane domain. Insulin binds to the α subunit and activates tyrosine kinase of the intracellular β subunit to transmit the insulin signal.Using the expression vector of the truncated human insulin receptor (hIR), we have constructed a stable Chinese hamster ovary (CHO) cell line which secretes the His-tagged α subunit (insulin-binding domain) of hIR into medium. To examine characteristics of the His-tagged hIRα, we purified the protein secreted from the CHO cells. The His-tagged hIRα was glycosylated and processed a dimer. The molecule bound insulin with an affinity similar to that of the intact hIR. The His-tagged full length of hIR was autophosphorylated by insulin stimulation in CHO cells.We will purify the large amount of IRα, co-crystalize it with insulin and determine the crystal structure.

人胰岛素受体(HIR)是由两个α亚基(735个氨基酸，135 kDa)和两个β亚基(620个氨基酸，95 kDa)组成的糖蛋白。HIR形成二硫键连接的异四聚体(β-α-α-β)。该受体的胞外区由整个α亚基和预测跨膜区外的β亚基的一部分组成。利用截短型人胰岛素受体(HIR)的表达载体，我们构建了一个稳定的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系，该细胞系能分泌His标记的α亚单位(胰岛素结合区)。为了检测His标记的HIRα的特性，我们纯化了CHO细胞分泌的蛋白质。His标记的hirα被糖基化并加工成二聚体。该分子与胰岛素结合的亲和力与完整的HIR相似。His标记的全长HIR在胰岛素刺激下在CHO细胞中被自动磷酸化，我们将纯化大量的IRα，并将其与胰岛素共结晶并测定其晶体结构。

项目成果

期刊论文数量（35）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

KATP Channel Knockout Mice with transgenic Mice Expressing a Dominant-Negative Form of Human Insulin receptor have Glucose Intolerance but not Diabetes.

KATP 通道敲除小鼠与表达显性阴性形式人胰岛素受体的转基因小鼠具有葡萄糖不耐症，但没有糖尿病。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Endocrine J. 51・2
影响因子：
0
作者：
Yoshiko Kanezaki,;Kazuhiro Kishi;Yousuke Ebina et al.
通讯作者：
Yousuke Ebina et al.

Use of RNA-interference-mediated gene silencing and adenoviral overexpression to Elucidate the roles of AKT/PKB-isoforms in insulin actions

利用 RNA 干扰介导的基因沉默和腺病毒过表达来阐明 AKT/PKB 亚型在胰岛素作用中的作用

DOI：
发表时间：
2003
期刊：
J.Biol.Chem. 278・30
影响因子：
0
作者：
Tomonari Muramatsu;et al.;Tomoyuki Yuasa;Tomoyuki Yuasa;Satoshi Ugi;Yoshiko Kanezaki;Xiuli Wu;Makoto Hiromura;Toshiyuki Obata
通讯作者：
Toshiyuki Obata

Injection of the insulin receptor alpha subunit increases blood glucose levels in mice

注射胰岛素受体α亚基会增加小鼠的血糖水平

DOI：
发表时间：
2003
期刊：
Biochem.Biophys.Res.Commun. 309,30
影响因子：
0
作者：
Tomonari Muramatsu;et al.;Tomoyuki Yuasa;Tomoyuki Yuasa;Satoshi Ugi;Yoshiko Kanezaki;Xiuli Wu;Makoto Hiromura;Toshiyuki Obata;Yoshiko Kanezaki
通讯作者：
Yoshiko Kanezaki

Asako Minami: "Increased insulin sensitivity and hypoinsulinemia in APS knockout mice"Diabetes. 52. 2657-2665 (2003)

Asako Minami：“APS 基因敲除小鼠的胰岛素敏感性增加和低胰岛素血症”糖尿病。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Inhibition of Art kinase activity by a peptide spanning the βA strand of the protooncogene TCL1

跨越原癌基因 TCL1 βA 链的肽对 Art 激酶活性的抑制

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
J Biol Chem. 279・51
影响因子：
0
作者：
Tomonari Muramatsu;et al.;Tomoyuki Yuasa;Tomoyuki Yuasa;Satoshi Ugi;Yoshiko Kanezaki;Xiuli Wu;Makoto Hiromura
通讯作者：
Makoto Hiromura