Bacterial cells were penetrated with chrysotile fibers and transformed to antibiotics resistance by incorporation of exogenous plasmid DNA
细菌细胞被温石棉纤维渗透,并通过掺入外源质粒 DNA 转化为抗生素抗性
基本信息
- 批准号:15580307
- 负责人:
- 金额:$ 2.37万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
- 财政年份:2003
- 资助国家:日本
- 起止时间:2003 至 2005
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
A suspension of recipient E.coli cells in stationary phase, chrysotile asbestos, and pUC18 donor DNA was spread over the surface of an LB agar plate using a streak bar several times, resulted in intracellular uptake of the plasmid DNA by the E.coli cells. The transformation efficiency was highest with a duration of cell exposure to chrysotile for more than 60 seconds and a 2% agar concentration. To improve transformation efficiency by chrysotile mediation, we systematically optimized various conditions and parameters. In comparison to chrysotile exposure without cations, exposure with cations produced up to 100-fold more transformants. Optimized conditions resulted in 10^6 transformants per μg pUC18 DNA. The drastic physical change due to ‘quick drying on the surface of the agar plate', when cells were exposed to chrysotile, was essential for transformation by chrysotile mediation. We suggest that DNA uptake by chrysotile asbestos mediation is the result of a mechanical physical transformation of the E.coli, since E.coli cells are not competent chemically. Electron microscopy of cells exposed to chrysotile suggested penetration of the E.coli membrane by chrysotile fibers. It is suggested that E.coli transformation by the plasmid DNA was the result of penetration by chrysotile fibers to which plasmid DNA is bound or adsorbed.
使用划线棒将处于稳定期的受体大肠杆菌细胞、温石棉和pUC 18供体DNA的悬浮液在LB琼脂平板的表面上涂布数次,导致大肠杆菌细胞对质粒DNA的细胞内摄取。当细胞暴露于温石棉60秒以上,琼脂浓度为2%时,转化效率最高。为了提高温石棉介导的转化效率,我们系统地优化了各种条件和参数。与接触温石棉而不接触阳离子相比,接触阳离子可产生多达100倍的转化体。优化的条件导致每μg pUC 18 DNA 10^6个转化体。当细胞暴露于温石棉时,由于“在琼脂板表面快速干燥”而引起的剧烈物理变化对于温石棉介导的转化是必不可少的。我们认为,温石棉介导的DNA摄取是大肠杆菌机械物理转化的结果,因为大肠杆菌细胞没有化学活性。对接触温石棉的细胞进行电子显微镜检查表明,温石棉纤维穿透了大肠杆菌的细胞膜。结果表明,质粒DNA转化大肠杆菌是纤蛇纹石纤维渗透的结果,质粒DNA与纤蛇纹石纤维结合或吸附。
项目成果
期刊论文数量(12)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Chrysotife fiberspevetrate Escherichia coli cell membrane and cause cell bursting by sliding friction force on agar plates
金黄草纤维通过琼脂板上的滑动摩擦力刺破大肠杆菌细胞膜并导致细胞破裂
- DOI:
- 发表时间:2004
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Yoshida;N;Saeki;Y.
- 通讯作者:Y.
NAOTO YOSHIDA, YUICHI SAEKI1: "Chrysotile Fibers Penetrate Escherichia coli Cell Membrane and Cause Cell Bursting by Sliding Friction Force on Agar Plates"Journal of Bioscience and Bioengineering. 97(in press). (2004)
NAOTO YOSHIDA、YUICHI SAEKI1:“温石棉纤维穿透大肠杆菌细胞膜并通过琼脂板上的滑动摩擦力导致细胞破裂”生物科学与生物工程杂志。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Chestnut bur-shaped aggregates of chrysotile particles enable inoculation of Escherichia coli cells with plasmid DNA
- DOI:10.1007/s00253-004-1649-8
- 发表时间:2004-10-01
- 期刊:
- 影响因子:5
- 作者:Yoshida, N;Saeki, Y
- 通讯作者:Saeki, Y
Chrysotile fibers penetrate Escherichia coli cell membrane and cause cell bursting by sliding friction force on agar plates.
温石棉纤维穿透大肠杆菌细胞膜,通过在琼脂板上的滑动摩擦力引起细胞破裂。
- DOI:
- 发表时间:2004
- 期刊:
- 影响因子:2.8
- 作者:N. Yoshida;Y. Saeki
- 通讯作者:Y. Saeki
Mutagenesis of bacteria by fibrous or clay minerals
纤维或粘土矿物对细菌的诱变
- DOI:
- 发表时间:2004
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Yoshida;N;Nakata T;Ohta K
- 通讯作者:Ohta K
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- 资助金额:
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