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ヒト未梢血単球の遊走現象を担う新規AGE受容体の同定と機能分析

负责人外周血单核细胞迁移现象的新型AGE受体的鉴定和功能分析

基本信息

批准号：
15590948
负责人：
堺政和
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15590948/
关键词：
AGE ヒト単球遊走活性 AGE受容体 SR-A RAGE CD36 糖尿病性血管合併症動脈硬化

项目摘要

糖尿病血管合併症の発症要因としてメイラード反応後期生成物(AGE:Advanced Glycation Endproducts)が注目されている。病変部に蓄積したAGE構造体はAGE受容体を介して、種々のサイトカインや成長因子の産生亢進などの種々の細胞応答を惹起し、糖尿病合併症の発症・進展に関与している。最近、グルコース以外の中間アルデヒドによるAGE生成が注目されている。蛋白(BSA)をその一つであるグリコールアルデヒド(GA)によって修飾した化学修飾蛋白(GA-BSA)はヒト単球に対して遊走活性を示すことを我々は見出した。しかし、この遊走活性はSR-A、CD36、RAGEなどの既知AGE受容体に対する中和抗体によって阻害されなかったことから、新規AGE受容体の存在が強く示唆された。本研究では、ヒト単球から新規AGE受容体のクローニングを試み、以下の結果を得た。ヒト単球細胞膜分画から可溶化分画を得て、GA-BSAアフィニティーカラムに結合し、且つ、BSAアフィニティーカラムに結合しない分画を精製する。このサンプルをプロテオーム解析法によって解析した。具体的には、このサンプルを2次元電気泳動を行い、6つのスポットを同定した。これらのスポットを取り出し、トリプシンでペプチドへ分解して、TOF-MASSによる質量分析を行い新規蛋白の同定を行った。現在まで、これらのスポットの分離を独立に繰り返して行っている。現在まで、新規蛋白と考えられる2つの候補蛋白を同定しつつある。また、既知蛋白として、インターロイキン7受容体前駆体、インターロイキン1受容体前駆体などが同定されている。平成16年度は、これらの蛋白を過剰発現して、GA-BSAとの結合を検討して、新規AGE受容体であることを明らかにして行く。

The main causes of diabetic vascular complications are Advanced Glycation endproducts (AGE) The accumulation of AGE constructs in the disease region is related to the development and progression of diabetic complications, including the induction of AGE receptors, the production of growth factors, and the activation of cell responses. Recently, the middle of the group outside the group is lost, and the AGE generation is in the middle. Protein (BSA) has been shown to be chemically modified by protein (GA) and to be active in the presence of protein (GA). The presence of SR-A, CD36, RAGE and neutralizing antibodies against known AGE receptors is strongly indicated by the presence of new AGE receptors. The results of this study are as follows: Cell membrane fractionation is solubilized and fractionated, and GA-BSA is combined and purified. The analysis method of the first batch of samples was adopted. The specific parameters are: 2-D electromigration, 6-D electromigration and 6-D electromigration. The quality of the products was analyzed by TOF-MASS. Now, we're going to separate them from each other. Now, the new regulation protein test 2 The protein is known as protein, protein 7 receptor precursor, protein 1 receptor precursor. In 2016, the protein was discovered, GA-BSA was discussed, and the new AGE receptor was developed.