Molecular mechanisms of ribosome degradation in host defense of insect cells

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Autographa californica 核多角体病ウイルス（AcMNPV）のP143と相互作用するカイコ細胞因子をアフィニティー精製カラムにより探索するため，AcP143最小領域の大量発現を行った．AcP143最小領域の配列をバキュロウイルスタンパク質発現系であるバクミド（AcBac）に挿入し組換えバクミドを作成した．AcP143の最小領域と相同なカイコNPV P143（BmP143）配列についても組換えバクミドを作成した．得られたそれぞれの組換えバクミドDNAをSf9細胞にトランスフェクション法で導入することによって，AcP143最小領域およびそのBmP143相同体の発現を確認することができた．トランスフェクションした細胞培養液から組換えウイルスが得られたので，組換えウイルスをSf9細胞に感染させることでそれぞれの発現タンパク質を大量に回収し，回収したタンパク質を用いてアフィニティー精製カラムの作成を進める．これまでに，AcP143最小領域の中で6つのアミノ酸（H514，H528，V556，S564，F577，A599）がrRNA分解に関与し，Q325はAcP143最小領域の構造維持などに機能していることを示した．これらのアミノ酸が異常タンパク質の形成に関わり，そのストレス応答としてrRNA分解が誘導されている可能性がある．そこで，BmP143最小領域のQ326，V529，T600（AcP143のQ325，H528，A599に相当）の各アミノ酸を置換し，異常構造をとらせることによってrRNA分解が誘導されるかを調査した．その結果，今回行ったBmP143最小領域の１アミノ酸置換だけではrRNAの分解は誘導されなかった．