Development of in situ SPA with wedge-shaped sample

楔形样品原位 SPA 的开发

• 批准号: 22H02559
• 负责人: 加藤 貴之
• 金额: $ 11.23万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02559/
• 关键词: 単粒子解析; 楔形試料; 細胞内単粒子解析; cryo-EM; FIB-SEM; クライオ電子顕微鏡; 単粒子解析法; 収束イオンビーム; FIB; in situ SPA

タンパク質は生命活動の根幹であり、タンパク質の機能異常は病気を引き起こす。また、ウイルスなどの病原体は特定のタンパク質に結合することで感染が開始されるため、タンパク質を知ることは病気の治療や創薬のおいて最も重要な要素である。近年の創薬は構造情報に基づいた"Structure based drug design"が主流である。そのため、自然な状態のタンパク質の構造情報を得る手法は創薬の基盤技術になり得る。一般的に創薬に用いることができる高分解能な構造情報は細胞内から精製されたタンパク質を用いられ、細胞内で今まさに機能しているタンパク質の構造情報を高分解能で得る方法は未だに確立していない。本研究では凍結させた細胞を収束イオンビーム（FIB）を用いて、楔形に切削し、十分に薄い場所のみをクライオ電子顕微鏡にて撮影し、単粒子解析法を用いて細胞内のタンパク質の構造を解析する方法を確立することを目的としている。FIBは試料を非常に薄く切削できるが、通常の方法では高分解能な情報を得るには不十分であるため、まず楔形試料の切削の条件を検討した。特に自動切削と組み合わせた場合の１試料の作成時間、FIB装置からクライオ電子顕微鏡まで移送する際の力学的な安定性の注意し、実験を行なった。標準サンプルである酵母を用いて楔形試料の作成を試みたところ、手前が厚く奥が薄い楔形の試料を作成することに成功したが、奥の薄い部分の厚さは一定ではなく、リアス式海岸のように不均一に削られることが確認された。そこで手前が薄く奥が厚い逆楔形にすると比較的均等に薄い試料を作成することができた。自動切削を使ってある程度の厚さまで削った後、手動で楔形を作成することで、８時間に7箇所程度の楔を作成することができた。

The root cause of life-related activities can be induced by frequent illnesses. The most important factor in the treatment of infectious disease is the most important factor in the diagnosis and treatment of infectious disease. In recent years, there has been a lot of love-making, such as "Structure based drug design" and "mainstream love". If you don't know what to do, you don't have to do anything about it. You can't do it. You can't do it. In general, the high resolution method is used to create the information system. In the cell, the system is used. In the cell, the machine is used. The high resolution method is used to determine the accuracy of the system. The purpose of this study is to make sure that the purpose of this study is to make sure that the method of FIB is based on the use of microphones, wedge cutting tools, microphones, and particle analysis. in this study, the micrographs of microphones, wedges, microcomputers, and particle analysis were used in this study. The FIB material is very thin, the general method is high decomposition energy, the temperature is not very high, the wedge material is very thin, the cutting condition is low. The special automatic cutting machine assembly is used to assemble the material and the FIB device is used to analyze the stability and stability of the mechanics of the micro-mechanical transfer of the computer. The standard yeast uses the wedge-shaped material to make the wedge-shaped material, the thick wedge-shaped material in front of the hand to make the wedge-shaped material, the thick part of the wedge-shaped material to make the wedge-shaped material, the thick part of the wedge-shaped material to make the wedge-shaped material, and the thick part of the wedge-shaped part to make sure that it is uniform. The thickness in front of the hand, the thickness, the thickness. The automatic cutting machine makes the automatic cutting machine thick and thick after cutting, the manual wedge is used to make the wedge, and the wedge at the temperature of 8 to 7 hours is used to make the wedge to make the wedge.

项目成果

Cryo-CLEM 法およびCryo-ET 法による糸状仮足先端の三次元構造観察

利用 Cryo-CLEM 和 Cryo-ET 方法观察丝状伪足尖端的三维结构

• 发表时间: 2022
• 作者: Miho Nakafukasako;Tomoya Higo;Yuki Gomibuchi;Hiroko Takazaki;Yusuke V. Morimoto,Takayuki Kato;Takuo Yasunaga
• 通讯作者: Takuo Yasunaga