Identification of macrotranscytosis based on clarification of the molecular mechanism of transport of tissue barrier penetrating peptides

今年度は、小腸透過環状ペプチドDNP（DNPペプチド）について、細胞内内在化に関わる分子の探索と同定を行った。まず、計画していた分子同定スクリーニングを実施する前に、DNPペプチドの配列から得られた分子情報をもとに推測した分子Xに関して検討を行った。Western blot法を用いた解析から、分子Xは小腸上皮細胞モデルであるCaco-2細胞に発現していることを見出した。次に、shRNAを用いて分子Xを安定遺伝子ノックダウンさせたCaco-2細胞を構築し、蛍光標識DNPペプチドの経細胞輸送解析を行った。その結果、分子Xの発現低下は、蛍光標識DNPペプチドのCaco-2細胞透過を有意に低下させた。また、分子Xに対する抗体を阻害剤として用いたところ、蛍光標識DNPペプチドのCaco-2細胞透過は有意に低下した。さらに、ヒト凍結切片を用いた免疫組織化学的解析から、分子Xはヒト小腸上皮細胞に局在することを見出した。以上の知見から、分子Xはヒト小腸においてDNPペプチドの経細胞輸送に関わる分子であることが示唆された。

今年度は、小腸透過環状ペプチドDNP（DNPペプチド）について、細胞内内在化に関わる分子の探索と同定を行った。まず、計画していた分子同定スクリーニングを実施する前に、DNPペプチドの配列から得られた分子情報をもとに推測した分子Xに関して検討を行った。Western blot法を用いた解析から、分子Xは小腸上皮細胞モデルであるCaco-2細胞に発現していることを見出した。次に、shRNAを用いて分子Xを安定遺伝子ノックダウンさせたCaco-2細胞を構築し、蛍光標識DNPペプチドの経細胞輸送解析を行った。その結果、分子Xの発現低下は、蛍光標識DNPペプチドのCaco-2細胞透過を有意に低下させた。また、分子Xに対する抗体を阻害剤として用いたところ、蛍光標識DNPペプチドのCaco-2細胞透過は有意に低下した。さらに、ヒト凍結切片を用いた免疫組織化学的解析から、分子Xはヒト小腸上皮細胞に局在することを見出した。以上の知見から、分子Xはヒト小腸においてDNPペプチドの経細胞輸送に関わる分子であることが示唆された。