Identification of macrotranscytosis based on clarification of the molecular mechanism of transport of tissue barrier penetrating peptides

基于阐明组织屏障穿透肽转运分子机制的大转胞吞作用的鉴定

• 批准号: 22H02786
• 负责人: 伊藤 慎悟
• 金额: $ 11.07万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02786/
• 关键词: 細胞膜透過ペプチド; 組織関門; マクロピノサイトーシス; トランスサイトーシス; ドラックデリバリーシステム

今年度は、小腸透過環状ペプチドDNP（DNPペプチド）について、細胞内内在化に関わる分子の探索と同定を行った。まず、計画していた分子同定スクリーニングを実施する前に、DNPペプチドの配列から得られた分子情報をもとに推測した分子Xに関して検討を行った。Western blot法を用いた解析から、分子Xは小腸上皮細胞モデルであるCaco-2細胞に発現していることを見出した。次に、shRNAを用いて分子Xを安定遺伝子ノックダウンさせたCaco-2細胞を構築し、蛍光標識DNPペプチドの経細胞輸送解析を行った。その結果、分子Xの発現低下は、蛍光標識DNPペプチドのCaco-2細胞透過を有意に低下させた。また、分子Xに対する抗体を阻害剤として用いたところ、蛍光標識DNPペプチドのCaco-2細胞透過は有意に低下した。さらに、ヒト凍結切片を用いた免疫組織化学的解析から、分子Xはヒト小腸上皮細胞に局在することを見出した。以上の知見から、分子Xはヒト小腸においてDNPペプチドの経細胞輸送に関わる分子であることが示唆された。

This year, the small intestine through the ring of DNP (DNP) to explore the same molecular changes in the intracellular The molecular identity of the target is determined by the molecular identity of the target. Western blot analysis showed that molecular X was detected in small intestine epithelial cells. Caco-2 cells were constructed using shRNA and DNP to stabilize gene expression. As a result, the expression of molecular X was reduced, and the transmission of DNP to Caco-2 cells was intentionally reduced. The antibody to the molecule X was used to block the passage of DNP to Caco-2 cells. Immunohistochemical analysis of frozen sections of small intestine and molecular X analysis of small intestine epithelial cells The above knowledge is related to the molecular transport of DNP in small intestine.