权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

血液・組織関門動態の分子形態学的研究

血组织屏障动力学的分子形态学研究

基本信息

批准号：
01F00129
负责人：
高田邦昭
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞膜での糖の膜通過に関与する糖輸送体は、細胞膜と細胞内コンパートメントであるエンドソームやポストゴルジコンパートメントとの間で平衡状態にある。細胞膜に分布する糖輸送体の量の定量化と膜上での分布様式を検討するために、培養細胞の細胞膜標本を細胞の生きている時になるべく近い状態で作製した。カバースリップ上に培養し分化させたマウスの3T3-L1細胞にニトロセルロース膜を圧着し、細胞の上面の細胞膜とそれにつながる細胞質を除去した。細胞内緩衝液で細胞内成分を洗い流すと、カバースリップに付着した細胞膜標本が得られた。走査電顕観察をおこなったところ、クラスリンコーテッドピットやカベオラの多数の陥凹などの細胞膜ドメインを観察することができた。また細胞膜を裏打ちする細胞骨格成分も明瞭であった。蛍光抗体法で糖輸送体を免疫染色し、蛍光強度を測定すると、細胞膜に存在する糖輸送体分子の量を定量することができた。インスリン刺激時と非刺激時について糖輸送体GLUT4について検討したところ、インスリン刺激により細胞膜で10倍程度の増加が認められた。これは放射性同位元素で標識した糖の取り込みのデータと良く一致していた。さらに高倍での蛍光顕微鏡観察により、細胞膜上における糖輸送体の不均一な分布が観察され、細胞膜上での糖輸送体に富むドメインの存在が示唆された。

Cell membrane sugar transport system, cell membrane and intracellular sugar transport system, cell membrane and intracellular sugar transport system, cell membrane and intracellular sugar transport system Quantification of the amount of sugar transporter in the cell membrane and the distribution pattern of sugar transporter in the cell membrane are discussed. The cell membrane of the 3T3-L1 cell is under pressure, and the cytoplasm of the cell membrane above the cell is removed. Intracellular buffer solution is used to wash intracellular components, and cell membranes are cleaned. The cell membrane of most of the cells in the cell wall was observed by the electric probe. The cell membrane is cut inside and the cell bone composition is clearly visible. Immunostaining of sugar transporters by light antibody method, determination of light intensity, quantification of sugar transporter molecular weight in cell membrane The glucose transporter GLUT4 increases by 10-fold when stimulated and when not stimulated. The radioactive isotope is identified by the sugar content. The heterogeneous distribution of sugar transporters on the cell membrane was observed by high-power microscopy, and the presence of rich sugar transporters on the cell membrane was also observed.