Identification of novel granulocyte/monocyte progenitors and elucidation of myeloid cell developmental pathway

マウス多能性前駆細胞(multipotent progenitors: MPPs)中にCタイプレクチンであるCLEC12Aを発現する新規細胞群を同定した。そこで、マウス骨髄から系列細胞マーカー陰性分画を粗精製し12種類の細胞表面マーカー抗体を用いて多重染色を行い、viSNE解析を行ったところ、CLEC12A+CD135-細胞が新規細胞分画として同定された。このCLEC12A+CD135-細胞をセルソーターによって純化し、骨髄球-赤血球系細胞への分化能力を検討するためにin vitroコロニー形成実験を行なった。この結果、CLEC12A+CD135-細胞は顆粒球、単球及び顆粒球/単球のコロニーを形成し、赤血球系細胞のコロニーは形成しなかった。また、同細胞をM-CSF存在下で培養するとマクロファージへと効率良く分化した。さらに、マウスストローマ細胞との共培養系を用いてリンパ球への分化能を検討したがT細胞及びB細胞への分化能は検出されなかった。次にin vivoにおける分化能を検討するため、CAG-EGFP Tgマウスの骨髄から2x104個のCLEC12A+CD135-細胞を純化し、B6・SJLマウスに移植した。移植後、継時的に末梢血を採血しCLEC12A+CD135-細胞由来の娘細胞の表現型を解析した。この結果、in vitroの実験結果と同様にCLEC12A+CD135-細胞は顆粒球と単球のみに分化した。これらのin vitro及びin vivoにおける分化能の解析結果から、CLEC12A+CD135-細胞は新規顆粒球/単球前駆細胞であると結論づけた。

マウス多能性前駆細胞(multipotent progenitors: MPPs)中にCタイプレクチンであるCLEC12Aを発現する新規細胞群を同定した。そこで、マウス骨髄から系列細胞マーカー陰性分画を粗精製し12種類の細胞表面マーカー抗体を用いて多重染色を行い、viSNE解析を行ったところ、CLEC12A+CD135-細胞が新規細胞分画として同定された。このCLEC12A+CD135-細胞をセルソーターによって純化し、骨髄球-赤血球系細胞への分化能力を検討するためにin vitroコロニー形成実験を行なった。この結果、CLEC12A+CD135-細胞は顆粒球、単球及び顆粒球/単球のコロニーを形成し、赤血球系細胞のコロニーは形成しなかった。また、同細胞をM-CSF存在下で培養するとマクロファージへと効率良く分化した。さらに、マウスストローマ細胞との共培養系を用いてリンパ球への分化能を検討したがT細胞及びB細胞への分化能は検出されなかった。次にin vivoにおける分化能を検討するため、CAG-EGFP Tgマウスの骨髄から2x104個のCLEC12A+CD135-細胞を純化し、B6・SJLマウスに移植した。移植後、継時的に末梢血を採血しCLEC12A+CD135-細胞由来の娘細胞の表現型を解析した。この結果、in vitroの実験結果と同様にCLEC12A+CD135-細胞は顆粒球と単球のみに分化した。これらのin vitro及びin vivoにおける分化能の解析結果から、CLEC12A+CD135-細胞は新規顆粒球/単球前駆細胞であると結論づけた。