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Comprehensive elucidation of the mechanisms of circulating microRNA variability during pancreatic carcinogenesis

全面阐明胰腺癌发生过程中循环microRNA变异的机制

基本信息

批准号：
22H02927
负责人：
松崎潤太郎
金额：
$ 11.15万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02927/
关键词：
マイクロRNA 膵臓がん CRISPR/Cas9 膵がん細胞外小胞

项目摘要

膵がんのように早期診断技術開発が待望される腫瘍において、血中マイクロRNA (miRNA)診断の実用化が期待されている。多くの臨床検体の解析から、そのコンセプトの正しさは実証されているが、血中miRNAによってなぜ膵がんが診断できるのか、正確には証明しきれていない。特に膵がん発がん過程において、KRASを筆頭としたドライバー遺伝子変異の蓄積のどの段階で血中miRNAプロファイルが変化するのかは不明である。加えて、膵腫瘍の発生によって周辺の細胞や免疫細胞などが反応し、分泌するmiRNAが変化することも、血中miRNAに大きく影響している可能性がある。本研究はこれらの点を考慮し、マウスで膵発がん過程での血中miRNA変化を追跡し、その意味を理解することを目的とする。まずマウス膵管初代培養より樹立した膵前駆細胞に対し、CRISPR/Cas9を用いて遺伝子編集を行い、KRAS、CDKN2A、TP53、SMAD4の変異を導入した膵多段階発がん細胞株系列を作成した。各細胞の培養上清より細胞外小胞を収集し、miRNA-seqによってmiRNAプロファイルを網羅的に解析した。これにより、各ドライバー遺伝子変異に固有のmiRNA分泌パターンの変化を見出した。さらに当該細胞株にそれぞれLuciferaseを導入した後、免疫不全マウス(ヌードマウス)の膵臓内に移植し、各遺伝子変異が細胞増殖や生命予後に与える影響をin vivoで明確にした。

The development of early diagnostic techniques is awaited, and the application of miRNA (miRNA) in blood is awaited. The analysis of many clinical manifestations, the correct diagnosis of various types of miRNA, and the correct diagnosis of miRNA in the blood. In particular, the development process of KRAS is unknown, and the accumulation of miRNA in the blood is unknown. There is a possibility that miRNA production and secretion in peripheral cells and immune cells may be affected by miRNA in the blood. This study focuses on the study of miRNA evolution and its implications. In addition, CRISPR/Cas9 gene assembly, KRAS, CDKN2A, TP53 and SMAD4 gene assembly were introduced into the primary culture of the cells. The culture supernatant of each cell was collected and miRNA-seq was analyzed. The expression of miRNA in different genes was found in different tissues. When Luciferase was introduced into the cell line, the immune deficiency was identified in vivo, and the effects of different genes on cell proliferation and life were determined.