Molecular mechanism for aggrephagy induction

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NUTの標的分子の候補として同定したタンパク質を、ヒトcDNAライブラリーからクローニングし、大腸菌から精製して表面プラズモン共鳴 (BiaCore)解析を行った。標的タンパク質はN末端にHis-tagをつけて、NTA-センサーチップに固定した。しかしながら、タンパク質をセンサーチップに安定に固定することはできたが、NUT-29をはじめとしたNUT化合物が、センサーチップ自身と非特異的な結合をしてしまうことがわかり、Biacore解析ができないことがわかった。NUT化合物の標的分子を、マグネットビーズと共有結合させたNUT化合物と共沈降させ、ウエスタンブロッティングにより、NUT化合物依存的に検出されることを確認した。このことは、少なくても候補分子(proteinX)はNUTに結合することを意味している。そこで、proteinXのノックダウンコンストラクトを作成し、タウ凝集細胞株に導入してNUT化合物によるタウ凝集抑制効果を調べた。その結果、proteinXのノックダウンによる細胞増殖抑制が観察されたものの、NUT化合物によるタウ凝集体の抑制効果が有意に現象した。このことは、proteinXがNUT化合物の標的分子の一つであり、タウ凝集体分解促進のためのシグナルカスケードの一端を担っていると考えられる。