神経血管ユニットを構成するグリア終足分子のアルツハイマー病病理形成における役割

Aβ病理モデルマウスを用いた検討から，神経血管ユニットの形成に関わるアストロサイトの終足に発現する分子群が，モデルマウスの脳内で局在変化し，Aβ斑の周辺に集積していることを見出した。そこで本研究では，アミロイド病理モデルマウスを用い，アミロイド斑形成初期に，アストロサイトの終足に発現する分子の発現を変化させた場合の脳病理の変化を解析する。さらにアストロサイト終足分子の変化を反映するような脳脊髄液・血液バイオマーカーの探索も行う。本年度は，同定したアストロサイト終足に発現する分子を発現抑制するためのアデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターの作成を行なった。着目する分子をアストロサイト特異的に発現抑制するために，microRNAを利用した。アストロサイト特異的プロモーター下に着目する終足分子に対するmiRNA，さらにmiRNAの発現を確認するため蛍光タンパク質mCherryを配置した。AAVは，眼窩静脈叢からの投与ができるよう血液脳関門透過性の高いAAV-PHP.eB型を用いて作製した。最初にAAVの投与を行うAβ病理モデルマウスの準備も終了した。また，血液バイオマーカーの探索を行う目的で，Aβ病理モデルマウス血液中の代謝物の検索を開始した。一方，ショウジョウバエAβモデルを用いた検討に関しては，ショウジョウバエで脳の恒常性維持，脳血液関門様の機能を担うグリア細胞に着目し，脳内で産生されたアミロイドの排出や代謝に関わる分子の探索を行う。本年度は，ショウジョウバエのグリア細胞で，Aβの神経細胞外での発現に対して変動する遺伝子を網羅的に探索するため，タグ付きのリボソームタンパク質をグリア特異的に発現し，細胞種特異的RNAを回収できるシステムの構築を行なった。

Aβ病理モデルマウスを用いた検討から，神経血管ユニットの形成に関わるアストロサイトの終足に発現する分子群が，モデルマウスの脳内で局在変化し，Aβ斑の周辺に集積していることを見出した。そこで本研究では，アミロイド病理モデルマウスを用い，アミロイド斑形成初期に，アストロサイトの終足に発現する分子の発現を変化させた場合の脳病理の変化を解析する。さらにアストロサイト終足分子の変化を反映するような脳脊髄液・血液バイオマーカーの探索も行う。本年度は，同定したアストロサイト終足に発現する分子を発現抑制するためのアデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターの作成を行なった。着目する分子をアストロサイト特異的に発現抑制するために，microRNAを利用した。アストロサイト特異的プロモーター下に着目する終足分子に対するmiRNA，さらにmiRNAの発現を確認するため蛍光タンパク質mCherryを配置した。AAVは，眼窩静脈叢からの投与ができるよう血液脳関門透過性の高いAAV-PHP.eB型を用いて作製した。最初にAAVの投与を行うAβ病理モデルマウスの準備も終了した。また，血液バイオマーカーの探索を行う目的で，Aβ病理モデルマウス血液中の代謝物の検索を開始した。一方，ショウジョウバエAβモデルを用いた検討に関しては，ショウジョウバエで脳の恒常性維持，脳血液関門様の機能を担うグリア細胞に着目し，脳内で産生されたアミロイドの排出や代謝に関わる分子の探索を行う。本年度は，ショウジョウバエのグリア細胞で，Aβの神経細胞外での発現に対して変動する遺伝子を網羅的に探索するため，タグ付きのリボソームタンパク質をグリア特異的に発現し，細胞種特異的RNAを回収できるシステムの構築を行なった。