Development of anti-Parkinson's disease drugs enhancing neuronal autophagy

申請書内容に従い、下記の実験を行った。1) スクリーニングシステムの構築：　分担者森健策と協力し、オートセルカウンター（イメージングによる）を用いたhigh-throughputスクリーニングシステムを構築し、約1300の既存薬スクリーニングを完遂した。また斉木グループでImageJを用いた独自のアルゴリズムによってもう一つのスクリーニングシステムを構築した。2) この新たなリソソーム分布を変化させることに着目したオートファジースクリーニングから、6個の新規機序によるオートファジー誘導化合物を同定した。それぞれを2つのカテゴリーに分け、3種の化合物については、細胞に酸化ストレスを与えることにより、その防御起点としてオートファジーが誘導されている可能性が考えられた。既報では、主に3つのリソソーム輸送のための分子複合体が提唱されている。これらを踏まえ、我々は酸化ストレス特異的に活性化されるリン酸化JIP4-TRPML1複合体を新たに特定し、報告した（Sasazawa Y, et al. EMBO J, 2022）。今回のスクリーニングにより新たに同定された化合物のそれぞれについて分子メカニズム（リソソームおよびダイニンと結合する分子複合体）の詳細を検討している。3) 新たな分子作用機序として、JIP4のリン酸化を介する経路を特定した。4) これらをリード化合物とした新規スクリーニングシステムを構築している。

申請書内容に従い、下記の実験を行った。1) スクリーニングシステムの構築：　分担者森健策と協力し、オートセルカウンター（イメージングによる）を用いたhigh-throughputスクリーニングシステムを構築し、約1300の既存薬スクリーニングを完遂した。また斉木グループでImageJを用いた独自のアルゴリズムによってもう一つのスクリーニングシステムを構築した。2) この新たなリソソーム分布を変化させることに着目したオートファジースクリーニングから、6個の新規機序によるオートファジー誘導化合物を同定した。それぞれを2つのカテゴリーに分け、3種の化合物については、細胞に酸化ストレスを与えることにより、その防御起点としてオートファジーが誘導されている可能性が考えられた。既報では、主に3つのリソソーム輸送のための分子複合体が提唱されている。これらを踏まえ、我々は酸化ストレス特異的に活性化されるリン酸化JIP4-TRPML1複合体を新たに特定し、報告した（Sasazawa Y, et al. EMBO J, 2022）。今回のスクリーニングにより新たに同定された化合物のそれぞれについて分子メカニズム（リソソームおよびダイニンと結合する分子複合体）の詳細を検討している。3) 新たな分子作用機序として、JIP4のリン酸化を介する経路を特定した。4) これらをリード化合物とした新規スクリーニングシステムを構築している。