elucidation of enos regulation mechanism by a novel resistin-like molecule beta, and Its relationship to atherosclerosis

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動脈硬化の発生・維持・進展の機序としてのRELMβ/eNOS/NO pathwayの解明のために、in vitro細胞実験として、以下の実験を実施した。ヒト臍帯静脈血管内皮細胞（HUVEC）およびマウス血管内皮由来細胞（EOMAC）を用いて、RELMβ投与による細胞内NO産生量はNO感受性蛍光色素DAF-2を用いて、細胞外NO濃度をGreiss法により測定。RELMβ投与によるHUVECおよびEOMACでのeNOSの発現およびリン酸化、eNOS制御に関連するAkt、AMPK、ERK1/2、p38、JNK、PKC、HSP90の発現ならびにリン酸化をWestern blot法を用いて検討。RELMβ投与によるHUVECおよびEOMACよりmRNAを抽出して、DNAアレイおよび RNA seq によるeNOS関連遺伝子をはじめとした網羅的遺伝子解析をバイオインフォマティクスを用いた遺伝子ネットワーク解析を用いて行った。同様の検討を、RELMβ欠損マウス（作製済）とRELMβ過剰発現マウス（作製済）より得られた血管内皮細胞において行なった。RELMβ投与によるHUVECならびにEOMACの細胞遊走能、増殖能や血管形成能を検討。また、in vivoマウス実験として、以下の実験を実施した。RELMβ欠損マウスに脂肪食を負荷する群とコントロール群において、血圧、心拍数、心機能、尿中NO代謝産物排泄量等の測定。RELMβ過剰発現マウスとコントロール群において、血圧、心拍数、心機能、尿中NO代謝産物排泄量等の測定した。ヒト血中RELMβ濃度測定用ELISAシステム作製した。RELMβヒトモノクロナル抗体作製から血ヒト血中RELMβ濃度測定用ELISAキットの作製までを独自に行い、血中RELMβ濃度測定系を新規に確立した。