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Establishment of the system for predicting pituitary dysfunction induced by immune checkpoint inhibitors

免疫检查点抑制剂诱发垂体功能障碍预测系统的建立

基本信息

批准号：
22H03127
负责人：
有馬寛
金额：
$ 11.23万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H03127/
关键词：
下垂体免疫チェックポイント阻害薬下垂体機能低下症 PD-1 PD-L1 CTLA-4

项目摘要

免疫チェックポイント阻害薬（ICI）によって高率に生じる下垂体機能障害には、主に抗PD-1抗体により発症するACTH単独欠損症と抗CTLA-4抗体により発症する複合型下垂体機能低下症という異なる2つの病型が存在する。我々は、いずれの病型においても臨床的診断前に患者血中に下垂体組織を認識する抗下垂体抗体が認められることをこれまで報告したが、その自己抗体の標的抗原は明らかではない。本研究の目的は、発症者に特異的に認められる自己抗体（抗下垂体抗体）の標的抗原を同定するとともに、抗体価を定量評価するELISAや標的抗原に特異的なリンパ球を定量化するELISPOTアッセイを確立し、ICIによる下垂体機能障害の発症予測を可能とするシステムを確立することである。令和4年度の研究では、正常ヒト下垂体mRNAからcDNAライブラリを作成し（16,000種類）、プラスミドをほ乳類細胞株（293T細胞）に導入してタンパクを発現させる実験系を確立した。8,000種類のプラスミド由来タンパクを発現させた細胞と4名の抗PD-1抗体関連ACTH単独欠損症の患者血清（発症時血清）で蛍光免疫染色を施行し、複数のウェルにおいて陽性反応を得た。陽性ウェル内のDNAシーケンスによりこれまでに3種の自己抗体標的タンパク候補を同定し、それらについてELISAの開発を開始した。このように、令和4年度は作成cDNAライブラリの半数（8,000種類）のプラスミドと抗PD-1抗体関連ACTH単独欠損症の血清を用いて実験を進めている。これに並行する形で残りの8,000種のプラスミドを用いた抗原スクリーニングも開始するとともに、別のICIである抗CTLA-4抗体関連複合型下垂体機能低下症の発症者血清を用いた実験の準備も行った。

Immune Inhibitor (ICI) has a high rate of pituitary gland dysfunction and is a primary anti-PD-1 antibody that can cause pituitary disease. ACTH monodeficiency syndrome, anti-CTLA-4 antibody, combined hypopituitarism syndrome, and complex hypopituitarism syndrome exist. I know the type of disease and the pituitary tissue in the patient's blood before clinical diagnosis. I know the anti-pituitary gland. Antibodies are recognized and reported, and antibodies are labeled and antigens are reported. The purpose of this study is to identify the target antigen of autoantibodies (anti-pituitary antibodies) specific to patients with leprosy, identify the target antigen, and quantitatively evaluate the antibody target using ELISA. Specific なリンパを quantification, ELISPOT アッセイを established, ICI にIt is possible that pituitary gland dysfunction has been diagnosed and confirmed. Reiwa 4th year research project, normal pituitary gland mRNA and cDNA ライブラリを production (16,000 types ), and the プラスミドをほ breast cell line (293T cells) was introduced into the してタンパクを発成させる実験 system and was established. 8,000 kinds of のプラスミド origin of タンパクを発成させたcell and 4 famous anti-PD-1 antibody-related ACTH 単The patient's serum (serum during leukemia) was subjected to photoimmunostaining and multiple positive reactions were obtained. Positive ウェル内のDNAシーケンスによりこれまでに3 kinds of autoantibodiesタンパク candidate を同定し、それらについてELISAの开発をstart した.このように、Reiwa 4th year, half of the cDNA ライブラリののライブラリののプラThe anti-PD-1 antibody is related to ACTH monodeficiency syndrome and the serum is used.これに parallel するshaped で residual りの8,000 kinds of のプラスミドをいたantigen スクリーニングもstart するとともに, separateのICIであるAnti-CTLA-4 antibody-related complex hypopituitarism syndrome patients' serum is used to prepare も行った.