選択的オートファジー受容体p62の核局在による口腔癌の発がんメカニズムの解明

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令和4年度は、p62の細胞内での局在異常によるシグナルの変化を確認するために、I．基礎的探索　1) in vitroの実験：核排出シグナル（Nuclear export signal :NES)配列にゲノム編集でミューテーションを入れて作出したΔNES p62-/-マウスより培養系に移した細胞内でのp62の核局在を共焦点レーザー解析で確認を行った。また、細胞抽出液中の可溶性画分と非可溶性画分でのユビキチンおよびp62の量をイムノブロットで確認したところ、ΔNES p62細胞では可溶性画分と非可溶性画分いずれでもp62が増加しており、非可溶性画分ではユビキチンが増大していたことを見出した。2) in vivoの実験： p62の核局在シグナル（Nuclear localization signal : NLS)とNESに変異を加えた ΔNLSおよびΔNES p62遺伝子改変マウスの表現型の解析のために生育曲線を描いたところ有意に体重減少を認め、生存率が異常に低かった。さらに生化学検査のデータの解析から検索したところ生体内で変異が最も大きい組織を探したところ腎臓に変異を認めていた。II． 臨床的探索として倫理審査承認後、口腔潜在的悪性疾患(OPMDs)70例を選択し、過去の病理標本のパラフィンブロックよりサンプルを収集し免疫染色を行った。医療記録から収集した臨床指標(年齢，性別，部位，飲酒歴，喫煙歴，部位)と 上皮異型の有無を調べ、さらに、核外輸送因子XPO1とYAP、Ki67　、p53の免疫染色を行った。p62については評価方法を、核内、細胞質、凝集群として分類した。OPMDsから癌化を認めた症例は6例で、これらの臨床指標および上皮異型、免疫組織学的指標とp62の核内の局在との関係の統計学的解析を開始した。