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A170欠損マウスを用いた難治性顎骨骨髄炎の修復過程における中枢性骨制御の解析

A170缺陷小鼠难治性颌骨骨髓炎修复过程中骨中枢调节分析

基本信息

批准号：
21659459
负责人：
柳川徹
金额：
$ 1.92万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659459/
关键词：
A170 STAT3 コンディッショナルノックアウト骨芽細胞破骨細胞

项目摘要

本年度の研究実施は以下の通りでおこなった。1)前年度までに制作した、中枢神経系特異的にA170の発現を欠失させたNestin-Cre x A170(f/f)コンディショナルノックアウト(=A170CKO)マウスについて、中枢での発現を免疫染色で調べたところ、A170CKOでは発現の低下が確認された。A170(f/f)をコントロールとし、A170CKOとフェノタイプを調べたところ、過食傾向にあったが、有意な差には至っていない。現在、18週まで体重測定を行っているが、今後のフォローが望まれる。これらを利用して,今後、骨解析を行う予定である。2)中枢神経系でのレプチンシグナルの解析:Ob-Rb受容体とそれに続く転写因子のSTAT3シグナルの異常を調べるため、核移行について免疫染色で蛍光ラベルし共焦点レーザー顕微鏡で局在を調べたところ、レプチン刺激により野生型マウスでは84%の弓状核神経細胞はSTAT3の移行がみられたが、A170nullKOでは27%にとどまった。また、STAT3以外のシグナルの異常をMAPK,p38について調べた。3)パッチクランプ法による神経伝達異常の解析:POMCニューロン特異的にGFPを発現させたeGFP-POMCtgマウスとA170ノックアウトマウスを掛け合わせ、POMCニューロンをGFP標識したA170ノックアウトマウスを作り、3-4週齢のマウスの脳を摘出し、視床下部を含むようにスライスし、ホールセル(全細胞)法でレプチン投与後の静止電位と活動電位を測定したところ、野生型との差はみられなかった。以上より、p62の作用点は中枢性であることが考えられるが、神経伝達には特定できず、今後詳細な検討が必要と考えられた。

This year's research has been carried out in the following ways. 1)In the previous year, the central nervous system-specific A170 was detected by Nestin-Cre x A170(f/f), and the central nervous system-specific A170 was detected by immunostaining. A170(f/f) is the most important part of A170CKO. Now, 18 weeks later, the weight measurement will be completed. In the future, bone analysis will be carried out in a predetermined manner. 2)Analysis of STAT3 in the central nervous system:Ob-Rb receptor and STAT3 in the central nervous system: abnormal regulation of STAT3 in the central nervous system; nuclear migration; immunostaining; confocal microscopy; 84% of STAT3 in the arcuate nervous system; A170nullKO; 27% of STAT3 in the central nervous system. The abnormal MAPK,p38, is detected in all cases except STAT3. 3) Analysis of abnormal signal in brain:POMC specific GFP detection and A170 identification, POMC GFP identification, A170 identification, 3-4 weeks of extraction, lower part of the optic bed including GFP detection and A170 identification, whole cell (whole cell) method, determination of resting potential after injection, wild type difference. The above points of action of p62 are central and specific, and detailed in the future.