外傷性脳損傷が受傷後に増悪する機序の解析

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ワルファリン服用時に外傷性脳損傷が増悪する機序の解析では、ビタミンK欠乏飼料で飼養したマウスにワルファリンを経口投与し、脳挫傷作成装置を用いて大脳皮質に局所性脳損傷を作製した。ワルファリン未投与と未受傷のマウスと比較した。受傷2時間、1日及び3日後にプロトロンビン時間と脳出血量を測定し、また、液体クロマトグラフ・タンデム質量分析計を用いてワルファリンと7-水酸化ワルファリンの血中濃度を定量した。ワルファリン高投与量において損傷群は未受傷群に比べ、受傷後1日目にプロトロンビン時間が有意に延長し、脳出血量は有意に増加し、また、ワルファリンと7-水酸化ワルファリンの血中濃度は高値となる傾向が観察された。従って、ワルファリン服用時には受傷後1日目に脳挫傷に伴う脳出血が増大することが示された。外傷性脳損傷が増悪する機序に受傷後の血液凝固能障害と血中ワルファリン濃度高値の関与が示唆された。外傷性脳損傷による脳内DNA断片化の観察では、マウスに脳挫傷作成装置を用い、大脳皮質に局所性脳損傷を作製した。コントロールとしてシャム群を作製して比較した。受傷後1、3、7、14日に灌流固定後に脳を摘出した。脳の凍結切片を作製し、DNA断片化の指標となるγH2AXの抗体を用いて免疫組織化学染色を行い、陽性細胞数を損傷側と非損傷側で比較をした。損傷群では受傷後3日と7日に抗γH2AX抗体陽性細胞数の損傷側と非損傷側の間での有意な差がみられた。陽性細胞は視床に集中していた。シャム群では全期間において損傷側と非損傷側で有意な差はなかった。多重染色の結果、損傷群損傷側の受傷後3日と7日に出現する抗γH2AX抗体陽性細胞は、抗NeuN抗体陽性細胞と重複し、外傷性脳損傷によるγH2AXのリン酸化は神経細胞で生じることが示唆された。