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腎症超早期状態を反映する尿中エクソソームタンパク質の質的・量的変動解析

反映肾病早期阶段的尿外泌体蛋白的定性和定量变化分析

基本信息

批准号：
22H03531
负责人：
柴田貴広
金额：
$ 11.32万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

2022年度は、尿中細胞外小胞に含まれるマーカー候補タンパク質の探索を行った。過食により肥満を伴って糖尿病を発症するとされるモデルラットOLETFおよびそのコントロールラットLETOについて、腎障害のマーカーである尿中アルブミン値の有意な上昇が認められない初期段階の尿を回収した。それぞれの尿サンプルから超遠心分離器を用いて細胞外小胞画分を得た。細胞外小胞マーカータンパク質であるCD9やAlixについて、ウェスタンブロットを行い、得られた細胞外小胞画分にこれらのタンパク質が存在することを確認した。また、粒子径測定の結果、100-200 nmの大きさであることを確認した。さらに電子顕微鏡観察により、脂質二重膜の小胞であることを確認した。これらの結果から、尿サンプルから細胞外小胞を回収できていることが確認された。得られたそれぞれのラット尿由来細胞外小胞よりタンパク質を抽出し、還元アルキル化後、トリプシン消化を行い、質量分析計に供し、OLETFラット尿由来細胞外小胞サンプルおよびLETOラット尿由来細胞外小胞サンプル間で変動のあるタンパク質を探索した。その結果、LETOラットサンプと比較してOLETFラット尿由来細胞外小胞サンプルにおいて有意に増加するタンパク質を見出した。この候補タンパク質について、特異的抗体を用いたウェスタンブロットによる評価を行ったところ、LETOラット尿由来細胞外小胞サンプと比較してOLETFラット尿由来細胞外小胞サンプルで有意に増加することを確認した。また、ウェスタンブロットにより、ラットの週齢が高くなっても両ラット間で有意な差があることが確認された。

In 2022, the extracellular vesicles in urine and urine were explored. Overfeeding is associated with diabetes mellitus, and it is recognized that the initial stage of urinary recovery is due to an intentional increase in urinary loss and renal impairment. The extracellular microcellular separation was obtained by using the ultra-telecentric separator. The extracellular microcellular structure was identified by CD9 and Alix, and the extracellular microcellular structure was identified. The results of particle diameter measurement, 100-200 nm and large diameter measurement were confirmed. The electron microscope was used to examine the lipid membrane. The results of this study are as follows: The results showed that the quality of urine derived extracellular cells was extracted, reduced, digested, analyzed and analyzed by OLETF. As a result, the LETO profile was compared with the OLETF profile, which was derived from extracellular microcellular profiles and was intentionally increased. The candidate for the quality of the antibody, the specific antibody, the evaluation of the urine derived extracellular cell, the comparison of the urine derived extracellular cell, the intentional increase of the antibody. It is confirmed that there is a difference between the two.