ヘム・チオレート蛋白質の反応性に及ぼす配位子周辺部位の影響について

周围配体位点对血红素硫醇蛋白反应性的影响

• 批准号: 04225230
• 负责人: 今井 嘉郎
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04225230/
• 关键词: P450; 脂肪酸水酸化酵素; 部位特異的変異体; 構造機能相関; 基質特異性; 反応位置選択性; ヘム鉄の配位状態

1.肝臓の薬物代謝型P450の内、同じ基質(ラウリン酸)の同じ位置を水酸化する2E1と2C2を選び、ヘム遠位に近接すると推定される保存性Thr→Ser置換体を作成、天然型と置換体の両者について基質(直鎖脂肪酸)のサイズを炭素数9より18まで順次変えたときの反応産物を分析し、鎖長変化に対するレスポンスを比較した。(1)2E1は鎖長選択性があまり強くないが、2C2は選択性が強く、炭素数14以上の脂肪酸は実際上水酸化しない。(2)水酸化位置の決め方は両P450で異なり、2E1はω側より炭素鎖を数え、炭素数に関わりなくω-1≫ω-2であるが、2C2はカルボキシル基側より数え、鎖長10以下の脂肪酸ではω水酸化体も生じる。(3)置換により位置選択性が甘くなるが、カルボキシル基より数えて一定範囲内は水酸化せず、2E1はω位の水酸化も行わない。また、炭素数9の脂肪酸に対する2C2の活性は置換によりかなり強まる。(4)以上の結果は、両P450ともに保存性Thrのメチル基が反応位置の決定に重要な役割を担い、基質のアルキル鎖を固定して酸素受け入れ位置を決めるが、メチル基を欠く変異体では固定できないため酸素挿入部位が広がることを示している。2C2ではω炭素の固定にもThrのメチル基が関与するが、2E1では別の機構が働くと推定される。2.両P450および2C14、2B5の保存性Thr→Lys置換体のスペクトル的性質を比較した。いずれも還元型は2つの状態をとるが、その平衡位置は分子種に依存し、また、2C14と2B5は窒素非配位型も含むことが判り、ヘム鉄とLysとの位置関係(したがって、保存性Thrの位置)に分子種による個性が示唆された。今後、2つの状態の構造的相違を解明し、反応位置選択性と結び付けられるようにしたい。

1. The same position as water acidification, 2E1 2C2, proximity, presumption, preservative Thr, Ser, natural fatty acids, carbohydrates, carbons, fatty acids, carbohydrates, fatty acids, carbohydrates, fatty acids, fatty acids, fatty acids, We need to make a comparison between the two countries. The main results are as follows: (1) the selection of 2E1, the selection of 2C2, the acidification of fatty acids with carbon number above 14 and the acidification of upper water. (2) the position of water acidification depends on the temperature of P450, the number of carbon, the number of 2C2, the number of fatty acids, the number of fatty acids, and the number of fatty acids below 10. (3) to select the optimal position for water acidification within a certain range, and 2E1 ω position for water acidification in a certain range. Fatty acid, carbon number 9, fatty acid, 2C2 activity, temperature, carbon number, fatty acid, fatty acid, carbon number, fatty acid, fatty acid (4) the results of the above results, the position of the P450 preservative Thr substrate determines the importance of service cutting, and the location of the acid is determined by the location of the fixation. the location of the acid is determined by the location of the fixation. the location of the acid is determined by the location of the acid, and the location of the acid is affected by the location of the acid. 2C2 carbon immobilization, Thr carbon immobilization, and 2E1 testing are based on the presumption of environmental pollution by other agencies. two。 P450

项目成果

Fukuda, T.: "Replacement of Thr-303 of P450 2E1 with Serine Modifies the Regioselectivity of Its Fatty Acid Hydroxylase Activity" Journal of Biochemistry. 113. 7-12 (1993)

Fukuda, T.：“用丝氨酸替换 P450 2E1 的 Thr-303 可改变其脂肪酸羟化酶活性的区域选择性”《生物化学杂志》。