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分子種によるP450活性部位の構造的個性とその反応性への影響

P450活性位点的结构特征及其对反应活性的影响取决于分子种类

基本信息

批准号：
05209226
负责人：
今井嘉郎
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.肝臓のP450の内、脂肪酸(omega-1)水酸化活性を有する2C2と2E1とは鎖長および水酸化位置の選択機構が異なることを昨年までに見出した。今回は、炭素数9〜18の直鎖脂肪酸について水酸化産物をガスマスで分析同定し、両者の違いを一層明確にした。例えば、炭素数16の脂肪酸2E1の保存性Thr→Ser変異体を作用させると7種類の水酸化体を生じるが2C2の変異体は水酸化せず、一方、炭素数9の脂肪酸に対しては2E1の変異体は専ら(omega-1)水酸化体を生じるが2C2の変異体はomega水酸化体をより多く生じた。アセチレン酸アルコール類に対する感受性にも両P450の基質認識機構を反映すると推察される相違が見られた。2.2C2、2E1、2C14の保存性Thr→Lys変異体を作成脂、スペクトル的性質を比較することにより3種類のP450で活性中心であるヘム遠位環境のトポロジカルな相違を示唆する結果を得た。なお、野性型でこの位置のアミノ酸がProとなっている3A1についてもLys変異体を作成し、スペクトル的性質を検討すべく精製を行いつつある。還元型P450の窒素性配位体は二つの状態(455nm型と422nm型)をとり得、これに5配位状態を加えた三者の平衡関係にP450の個性が現れるので、これを指票に今後より広く比較したい。3.結晶構造解析が報告されているP450camについて保存性Thr→Lys変異体を作成、精製、スペクトル的性質を調べた。2に述べた三者の平衡関係に基質カンファーの有無が影響することが分かった。カンファーは野性型では外性窒素配位を妨害するのに対して、Lys変異体では内性窒素配性を促進する点は注目に値する。大量精製に好適な材料であるので、今後、ヘム物性について解析をすすめ、2つの状態の実体を解明したい。

1. P450 in liver, fatty acid (omega-1) water acidification activity, such as 2C2 and 2E1, locking length and water acidification site selection mechanism, has been found in the past year. In this paper, carbon number 9 ~ 18 of the direct chain fatty acids in the hydrolysis of acid products, analysis and determination of the same, the violation of a layer of clear For example, carbon number 16 fatty acid 2E1 preservation Thr→Ser variant effect, seven kinds of water acidification body production, two C 2 variant water acidification body, one side, carbon number 9 fatty acid, two E 1 variant water acidification body production, two C 2 variant omega water acidification body production, two C 2 variant water acidification body production. The sensitivity of the P450 is reflected in the correlation between the two. 2. The preservation properties of 2C2, 2E1 and 2C14 were compared with those of P450 active centers of the three species. The position of the wild type is not determined by the acid. 3A1 is not determined by the property of the wild type. The equilibrium relationship between the two coordination states (455nm and 422nm) and the addition of the five coordination states of P450 is discussed. 3. Crystal structure analysis report P450cam preservation Thr→Lys variant preparation, refinement, selection of properties 2. The balance between the three factors is discussed. The wild type has the effect of inhibiting the coordination of exogenous hormones, and the heterogeneic type has the effect of promoting the coordination of endogenous hormones. A large number of refined and suitable materials are available for analysis in the future.