免疫刺激活性を持ちヘルパーT-cell由来リボ核酸の構造解析

具有免疫刺激活性的辅助 T 细胞来源的核糖核酸的结构分析

• 批准号: 04272216
• 负责人: 中村 國衛
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04272216/
• 关键词: ヘルパーT-cell; マクロファージ; 低分子量RNA; 相補性; PCR; DNA構造解析

抗原に対応した特異抗体の産生反応にはhelper T-cell、macrophage、B-cellの3種類の細胞の相互作用が不可欠である。Mφは抗原提示細胞として、helper T-cellは抗原識別細胞として、両者間の共同作業の結果意来上がったcognate antigenic informationをB-cellに送り込み、抗体蛋白の合成に向けてgene rearrangementが開始されると考えられている。T-cellのもつhelper functionはineact cellでなくとも"RNase sensitive cell extract"が代役を果たすことを捕らえた。helper-T-RNAとMφ-RNAとの間にはantigen-restricted complementarityがあり、RNase抵抗性の2重鎖を形成することが判明した。helper T-cell T-cell RNAはB-cellの核内に選択的に取り込まれたがB-cellの機能分化はrifampicin誘導体(AF/ABDMP)と投与により抑制された。これらの観察結果に則りhelper T-cell RNAの構造を決定し、免疫反応における作用機構を解明することを目指して実験を進めている。抗原刺激T-RNAおよびMφ-RNAを数種類抽出調整し、液相でのhybridizationを行い、RNaseにより消化後pronase処理、phenol抽出して調製した2重鎖RNAに、RNA-ligaseを用いてpoly-A sequenceを付加してから加熱急冷後、逆転写反応(primer:oligo-dT)を行い、次でterminal Deoxynucletyl transferaseとdCを用いてpoly-dCを添加してから、oligo daおよびoligo dGをprimerとして用いながらRCRにてDNAの増幅を施行。このcDNAの解析を施行中である。本年度中にこの相補性部位の塩基配列の解析を終了し、このDNAをprobeとして用いて非相補性部位の塩基配列も解明することを目指している。これらの作業の中から必然的にMφ-RNAの構造も部分的には判明してくるはずである。特に相補性部位の構造は同時に解明できるはずである。Mφ-RNAの非相補性部位の塩基配列はその後で既知のDNA-probeを用いて解析するよう計画している。

Antigen specific antibodies are produced in response to interactions between helper T-cells, macrophages, and B-cells. Mφ antigen prompt cells, helper T-cells, antigen recognition cells, and the results of joint operations between them indicate that the synthesis of antibody protein is initiated in the direction of gene rearrangement. T-cell helper function is not an act cell."RNase sensitive cell extract" Helper-T-RNA and Mφ-RNA are antigen-restricted complementarities. Helper T-cell T-cell RNA is selected from the B-cell nucleus, and the functional differentiation inducer (AF/ABDMP) is selected from the B-cell nucleus. The results of this study indicate that the structure of helper T-cell RNA is determined, and the mechanism of immune response is clarified. Antigen stimulation T-RNA and Mφ-RNA several kinds of extraction adjustment, liquid phase hybridization, RNase after digestion pronase treatment, phenol extraction and modulation, 2 relocked RNA, RNA-ligase in the use of poly-A sequence addition, after heating and quenching, reverse writing reverse (primer:oligo-dT) in the use of secondary terminal Deoxynucyl transferase and dC in the use of poly-dC addition, oligo da and oligo dG in the use of primer in the use of RCR amplification. The cDNA analysis is in progress. This year, the analysis of the nucleotide sequence of complementary sites was completed, and the DNA probe was used to clarify the nucleotide sequence of noncomplementary sites. In this work, the necessary Mφ-RNA structure is identified. The structure of the special complementary part is solved simultaneously. The nucleotide alignment of noncomplementary sites of Mφ-RNA was later analyzed using known DNA-probes.