細胞性粘菌のグループ-1-イントロンとそのORFの構造・機能と進化

盘基网柄菌属 1 组内含子及其 ORF 的结构、功能和进化

• 批准号: 05265203
• 负责人: 田仲 可昌
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05265203/
• 关键词: 細胞性粘菌; グループ1イントロン; self-splicing; DNA endonuclease; RNA maturase; ミトコンドリア

細胞性粘菌ミトコンドリアのCOXI遺伝子中には、すくなくとも3個のgroup-1-intronとORFが3個存在しているが、この3個のORFを大腸菌の発現ベクターpQEに組み込んで、大腸菌内で発現させたところ、ORF1だけが大腸菌の生育を阻害したので、このORFはイントロンのmobilityに関与るDNA endonucleaseである可能性が出てきた。そこで、この発現ベクターの中にイントロンのhoming site(group-1-intronのDNA-endonucleaseの切断配列)も同時に組込み、ORFを大腸菌内で発現させてみたが、このhoming siteは切断されなかった。おそらく、認識配列が変化してしまったものと考えられる。そこで、このタンパク質を大腸菌内で発現させた後、切断されているであろう大腸菌のゲノムDNAをパルスフィールドゲル電気泳動で分析したところ、大腸菌のゲノムが分解されて、約50Kbの付近にスメアとして検出された。この結果は、ORF1がDNA endonuclease活性を持つことを示している。細胞性粘菌(AX3株)ミトコンドリアのlarge rRNA遺伝子中のgroup-1-intronは、in vitroでself-splicingする。5'側と3'側のエクソンがself-splicingに影響するか否かを調べた。結果は、5'エクソン(約500NT)は80%も反応を阻害した。3'エクソン(約500NT)は70%も促進した。そこで、3'エクソンの部分をさらに削りこんでしらべたところ、80NT存在すれば促進作用が残存しており、その部分は特徴的なステム構造を形成していた。また、このintron中には、遺伝子としてのORFは認められないが、約10アミノ酸程度にわたって酵母のRNA maturaseに似ていた。そこで、数種の他の細胞性粘菌の同じ領域を調べたところ、AC4株にも同じような配列を見つけた。また、すでに報告されている、この遺伝子のintronをコンピューターで解析したところ、同じようなケースを1つ見つけた。この結果は、現在intron中に意味のあるORFが存在しないものでも、もともとは機能のあるORFが存在していたものが、次第に機能を失って消失してしまったものと考えられる。

There were 3 strains of group-1-intron ORF in 3 strains of COXI, 3 strains of pQE in 3 strains of myxomycetes, 3 strains of pQE in 3 strains of myxomycetes, 2 strains of myxomycetes, and 3 strains of pQE in 3 strains of ORF1. The possibility of "ORF" and "DNA endonuclease" is out of line. In the middle of the test, we can see that the homing site (group-1-intron DNA-endonuclease cut-off) is in the same time, the bacteria in the bacteria of ORF are detected, and the bacteria are cut off by homing site. I don't know what to do, and I don't know what to do. After the incubation of the bacteria, cut off the DNA, analyze the electrophoretic activity of the bacteria, analyze the degradation of the bacteria, analyze the decomposition of the bacteria, and use the 50Kb to analyze the temperature. The results showed that the activity of ORF1 DNA endonuclease showed significant difference. The cellular slime mold (AX3 strain) contains group-1-intron and in vitro self-splicing in the seed of large rRNA fungus. 5'I don't know. I don't know. Results the results showed that 80% of the total 500NT (about 50%) had negative effects on the growth of bacteria. 3 '500NT (about 70%) will promote the development of health care. In some cases, there is a positive effect on the remaining parts of the 80NT, and there are some special factors that cause the formation of the disease. In intron, the yeast RNA maturase is similar to that of the yeast, which is similar to that of the yeast, which is similar to that of the yeast. Bacteria, several kinds of other cell myxomycetes are the same as those in the field, and AC4 strains are the same as those in the same field. Please tell me that the report is not valid, that is, the intron report, the report and the report. The results show that in intron, it means that there is a negative impact on the ORF, that there is a failure in the ORF, and that the next opportunity is lost.