アネキシン型レクチンの認識ドメイン同定と相互作用の解析

膜联蛋白型凝集素识别域的鉴定和相互作用分析

基本信息

  • 批准号:
    09240212
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.15万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    1997
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1997 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

これまでにグリコサミノグリカン(GAG)認識生体分子が数多く報告されているが、ほとんど全てがヘパリン/ヘパラン硫酸結合能を持つタンパク質である。申請者が発見したアネキシン型(A型)レクチンは、ヘパリン/ヘパラン硫酸以外のGAGも認識する珍しい性質を持つタンパク質である。本研究ではA型レクチンの生物学的機能解明のための基礎として、レクチンのGAG認識ドメイン同定と相互作用の解析、アネキシンファミリーのタンパク質の一般的なリガンドであるリン脂質やカルシウムイオン結合部位との関連解明、通常細胞内に存在するアネキシンが細胞外へ分泌される機構解明、内在性リガンドの検索を研究課題として、平成9年度は以下に記す成果を得た。(1)ネオプロテオグライカンを用いた固相アッセイ法の開発各種のGAGをもつネオプロテオグリカンを調製し、これらをマイクロタイタ-プレートに固定化して、アネキシンとの結合試験を行う方法を考察し、より短時間でより簡便にGAG結合活性を半定量的に測定することに成功した。(2)アネキシンのGAG認識部位のマッピングアネキシンI、II、IV、V、VI、XVIのGAG結合活性を調べることにより、A型レクチンのGAG認識部位はN末端側ドメインではなく、C末端側の繰り返し構造中にあることが示唆された。(3)最近データベースに登録されたアネキシンIVとVのデータを利用してアネキシン分子の立体構造における塩基性アミノ酸残基の配置を観察したところ、GAGと静電気的に結合することが予想される塩基性アミノ酸残基の連なりが、繰り返し1と2にわたって1ヶ所、繰り返し3と4にわたって1ヶ所の合計2ヶ所存在した。GAG結合部位を特定するための部位特異的アネキシン変異体の設計に今後役立つと考えられる。
こ れ ま で に グ リ コ サ ミ ノ グ リ カ ン (GAG) understanding the raw body molecular が number く report さ れ て い る が, ほ と ん ど full て が ヘ パ リ ン / ヘ パ ラ ン sulfuric acid binding energy を hold つ タ ン パ ク qualitative で あ る. Applicants が 発 see し た ア ネ キ シ ン type (type A) レ ク チ ン は, ヘ パ リ ン / ヘ パ ラ ン sulfate outside の GAG も know す る Jane し い nature を hold つ タ ン パ ク qualitative で あ る. This study で は type A レ ク チ ン の biology function and interpret の た め の based と し て, レ ク チ ン の GAG know ド メ イ ン interaction on fixed と の parsing, ア ネ キ シ ン フ ァ ミ リ ー の タ ン パ ク qualitative の general な リ ガ ン ド で あ る リ ン lipid や カ ル シ ウ ム イ オ ン combining site と の masato even uttered, intracellular に usually exist す る ア ネ キ シ ン が secretion of extracellular へ さ れ る agencies interpret, internality リ ガ ン ド の 検 cable を research topic と し て に down under, pp.47-53 9 year は た を す achievements. (1) ネ オ プ ロ テ オ グ ラ イ カ ン を with い た solid-phase ア ッ セ イ method の open 発 various の GAG を も つ ネ オ プ ロ テ オ グ リ カ ン を modulation し, こ れ ら を マ イ ク ロ タ イ タ - プ レ ー ト に immobilized し て, ア ネ キ シ ン と の combination test line を う method し を investigation, よ り short で よ り simple に GAG binding activity を semi-quantitative に It was determined that する とに とに succeeded in た. (2) ア ネ キ シ ン の GAG know parts の マ ッ ピ ン グ ア ネ キ シ ン I, II, IV, V, VI, XVI の GAG combined with active を べ る こ と に よ り, type A レ ク チ ン の GAG は N terminal side know parts ド メ イ ン で は な く, C terminal side の Qiao り return し constructor に あ る こ と が in stopping さ れ た. (3) recent デ ー タ ベ ー ス に login さ れ た ア ネ キ シ ン IV と V の デ ー タ を using し て ア ネ キ シ ン molecular の three-dimensional structure に お け る salt basic ア ミ ノ acid residues の configuration を 観 examine し た と こ ろ, GAG と electrostatic 気 に combined す る こ と が to think さ れ る salt basic ア ミ ノ acid residues の even な り が, Qiao り return し 1 と 2 に わ た っ て A total of 2ヶ places exist, including 1ヶ, 3と, 4にわたって and 1ヶ. The gag-binding site を specific するため アネキシ specific variation <e:1> design に will be established in the future for <s:1> と examination えられる.

项目成果

期刊论文数量(3)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Satoh,A.: "Modulation of cell surface lectin receptors on K562 human erythroleukemia cells induced by transfection with annxin IV cDNA" Biol.Pharm.Bull.20. 224-229 (1997)
Satoh,A.:“用 annxin IV cDNA 转染诱导的 K562 人红白血病细胞表面凝集素受体的调节”Biol.Pharm.Bull.20。
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Satoh,A.: "Characterization of human p33/41(annexin IV),a Ca^2 dependent carbohydrate-binding protein with monoclonal anti-annexin IV antibodies,AS11 and AS17" FEBS Lett.405. 107-110 (1997)
Satoh,A.:“用单克隆抗膜联蛋白 IV 抗体、AS11 和 AS17 表征人 p33/41(膜联蛋白 IV),一种 Ca^2 依赖性碳水化合物结合蛋白,AS11 和 AS17”FEBS Lett.405。
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Ishitsuka,R.: "Glycosaminoglycan-binding properties of annxin IV,V,and VI." J.Biol.Chem.(印刷中). (1998)
Ishitsuka, R.:“Annxin IV、V 和 VI 的糖胺聚糖结合特性。”J.Biol.Chem.(出版中)。
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