新生タンパク質の品質管理における小胞体ER-60プロテアーゼの役割

内质网 ER-60 蛋白酶在新生蛋白质量控制中的作用

• 批准号: 09276212
• 负责人: 鬼頭 誠
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09276212/
• 关键词: ER-60プロテアーゼ; アポリポプロテインB; 小胞体; タンパク質分解

本研究では,ER-60プロテアーゼによる正常・異常タンパク質の認識及び活性調節機構を解明することにより,小胞体におけるタンパク質の品質管理の様相を明らかにすることを目的とした.アポリポプロテインB(アポB)はリポプロテインVLDLの構成タンパク質であり,その肝細胞からの分泌量は小胞体での分解によって調節されている.小胞体に局在するER-60プロテアーゼがこの分解を支配していることを証明するために,アポBとER-60プロテアーゼの会合の有無を解析した.[^<35>S]メチオニンで標識したHepG2細胞をタンパク質架橋剤で処理した後、1%NonidetP-40でタンパク質を抽出した.抗ER-60プロテアーゼ及び抗アポB抗体を用いて抽出液の免疫沈降を行い得られた沈降物をSDS-PAGEで分離後,ウエスタンブロティング及びフルオログラフィーで分析した.これにより,抗ER-60プロテアーゼ抗体によってアポBが共沈することまた抗アポB抗体によりER-60プロテアーゼが共沈することを明らかにした.さらに,小胞体内腔に局在する分子シャペロンBiPに対する抗体でアポBとER-60プロテアーゼが共沈することから,アポBは生合成後ER-60プロテアーゼ及びBiPと会合することを明らかにした.

This study aims to clarify the understanding and activity regulation mechanism of ER-60 cell quality and quality management. The composition of VLDL is regulated by the amount of VLDL secreted by hepatocytes and the decomposition of microsomes. Small cell structure in the ER-60, the decomposition of the control, the proof of the existence of the ER-60, the convergence of the analysis [^<35>S] HepG2 Anti-ER-60 and anti-ER-B antibodies were used to isolate the precipitate by SDS-PAGE. The anti-ER-60 anti-B antibody was isolated from the anti-ER-60 anti-B antibody. In addition, the small cell cavity is located in the molecular structure of the BiP, the antibody is generated by the ER-60 and the BiP, and the antibody is synthesized by the ER-60 and the BiP.

项目成果

K.Adeli, J.Macri, A.Mohammadi, M.Kito, R.Urade and D.Cavallo: "Apolipoprotein B Is Intracellularly Associated with an ER-60 Protease Homologue in HepG2 Cells" J.Biol.Chem.272. 22489-22494 (1997)

K.Adeli、J.Macri、A.Mohammadi、M.Kito、R.Urade 和 D.Cavallo：“载脂蛋白 B 与 HepG2 细胞中的 ER-60 蛋白酶同源物在细胞内相关”J.Biol.Chem.272。

R.Urade, T.Oda, H.Ito, T.Monyama, S.Utsumi and M.Kito: "Functions of Characteristic Cys-Gly-His-Cys(CGHC)and Gln-Glu-Asp-Leu(QEDL)Motifs of Microsomal ER-60 Protease" J.Biochem.122. 834-842 (1997)

R.Urade、T.Oda、H.Ito、T.Monyama、S.Utsumi 和 M.Kito：“特征 Cys-Gly-His-Cys (CGHC) 和 Gln-Glu-Asp-Leu (QEDL) 基序的功能

裏出令子, 森山達哉, 鬼頭誠: "小胞体におけるタンパク質の品質管理に関係するシステインプロテアーゼ" 月刊サイエンスリポート. (発表予定).

Reiko Urade、Tatsuya Moriyama、Makoto Kito：“半胱氨酸蛋白酶参与内质网蛋白质质量控​​制”月刊科学报告（待发表）。