小胞体特異的システインプロテアーゼの役割

内质网特异性半胱氨酸蛋白酶的作用

• 批准号: 08278213
• 负责人: 鬼頭 誠
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08278213/
• 关键词: 小胞体; システインプロテアーゼ; ER‐60プロテアーゼ

膜タンパク質および分泌タンパク質の生合成の場である小胞体には、新生ポリペプチド鎖の高次構造形成および品質管理を司る機能性タンパク質が多数存在する。これらの一つであるER‐60プロテアーゼは小胞体内腔に極在する水溶性の新規システインプロテアーゼである。本研究では、ER‐60プロテアーゼに含まれる特徴的なモチーフ(CGHC)の役割を明らかにするために、部位特異的変異遺伝子を作製し、発現タンパク質の性質を解析した。システインプロテアーゼであるER‐60プロテアーゼNIHA2組のCGHCモチーフが存在する。そこで、CGHCモチーフに種々の部位特異的変異を導入したヒトE‐R‐60プロテアーゼ遺伝子を作製し、大腸菌で発現させ、精製タンパク質の活性を測定した。両方のCGHCモチーフをAGHCに変えた変異タンパク質(C57A/C406A)および両方のCGHCモチーフをAGHSに変えた変異タンパク質(C60S/C409S)を作製した。。C57A/C406Aには野性型酵素と同様の活性があり、両モチーフの1番目ノウギョウシステインは活性には無関係であることが明らかとなった。一方、C60S/C409Sにも活性が検出されたが阻害剤に対する感受性が変化していた。すなわち、野性型酵素およびC57A/C406Aはチオール阻害剤であるpCMBで阻害され、セリンプロテアーゼの特異的阻害剤であるD・FPでは阻害されないのに対し、C60S/C409SはpCMBでは阻害されずDEPで阻害された。従って、CGHCモチーフの後側のシステイン残基が活性基システインであり、このシステイン残基がセリン残基に置換されたことによりシステインプロテアーゼからセリンプロテアーゼへ変換されたものと考えられる。

Membrane material, secretion material, biosynthetic field, small cell body material, new material The high-order structure of the プチド lock is formed by the quality control department and the functional タンパクquality is mostly present.これらの一つであるER-60 プロテアーゼは小cell intraluminal cavity に极在する水soluble の新码システインプロテアーゼである. In this study, the ER-60 プロテアーゼにcontains the special features of the CGHC なモチーフ(CGHC) Ming らかにするために, part-specific 変剉义缝子を产し, 発 appear タンパク性の性のanalytic した.システインプロテアーゼであるER-60 プロテアーゼNIHA2 group のCGHC モチーフが existence する.そこで, CGHC モチーフにkind 々のpart-specific 変differentを introduction したヒトE-R-60プThe production of ロテアーゼ缝子を is done, the coliform bacteria are present and the activity of the refined タンパクquality is measured.両方のCGHCモチーフをAGHCに変えた変different タンパク性(C57A/C406A)および両Square CGHC モチーフをAGHS に変えた変different タンパクquality(C60S/C409S)をproduced した. . C57A/C406A wild type enzyme and active enzyme, があり、モチーフの1 It's not related to the activity of the program. It doesn't matter. On the one hand, C60S/C409S is an active and active sensor that blocks the sensitivity of the sensor.すなわち, wild-type enzyme およびC57A/C406A はチオール扤であるpCMB でblock され, セリンプロテアーゼのspecific The stylus and FP stylus, C60S/C409S stylus, CMB stylus and DEP stylus.従って, CGHC モチーフのBack side のシステイン residue が active group システインであり, このシステイン residue がセリンResidue substitution methodらセリンプロテアーゼへ変change されたものと卡えられる.

项目成果

R.Urade & M.Kito: "Recombinant human microsmal ER‐60 protease" Molecular Biology of the Cell. 7. 134a (1996)

R.Urade 和 M.Kito：“重组人微小 ER-60 蛋白酶”《细胞分子生物学》7. 134a (1996)。