Molecular analysis of algicidal activity of extracellular serine protease produced by Pseudoalteromonas sp. strain A28

假交替单胞菌产生的胞外丝氨酸蛋白酶的杀藻活性的分子分析。

• 批准号: 14560070
• 负责人: KATO Junichi
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: HIROSHIMA UNIVERSITY
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14560070/
• 关键词: harmful algal bloom; marine bacterium; alga-lysing bacterium; serine protease; Pseudoalteromonas; Skeletonema costatum; Pseudolateromonas; Pseudoal teromonas

The marine bacterium Pseudoalteromonas sp. strain A28 produces an extracellular serine protease, designated protease I, to kill the red-tide alga Skeletonema costatum. The espI gene encoding protease I was cloned and completely sequenced. DNA sequence analysis revealed that protease I undergoes removals of 148-amino-acid and 4.6-kDa polypeptides from its amino and carboxy termini, respectively, to form the mature protein. The mature protease I contains two repeated sequences of 55 amino acid residues in the carboxy terminal region. A series of truncated genes of espI, encoding C-terminal truncation mutants of protease I, were generated. Transformants containing die truncated genes showed poor growth (Escherichia coli) or no growth (Pseudoalteromonas sp.). The Bacillus subtilis transformants produced and excreted the truncation mutants. A skim-milk-polyacrylamide gel electrophoresis protease assay showed that these truncation mutants had a proteolytic activity. Paper disk assays revealed that these deletion mutant proteins showed algicidal activity in the assay conditions

海洋细菌假交替单胞菌(PseudoAlternomonas sp.)菌株A28产生一种胞外丝氨酸蛋白酶，命名为蛋白酶I，可以杀死赤潮藻中肋骨条藻。克隆了编码蛋白酶I的espi基因，并对其进行了全序列测定。DNA序列分析表明，蛋白酶I的氨基末端和羧基末端分别去除了148个氨基酸和4.6 kDa的多肽，形成成熟的蛋白质。成熟的蛋白酶I在羧基末端含有两个55个氨基酸残基的重复序列。获得了一系列ESPI截短基因，编码蛋白酶I的C端截断突变体。含有DIE截短基因的转化子生长不良(大肠杆菌)或不生长(假交替单胞菌)。枯草芽孢杆菌转化子产生并分泌截短突变体。用脱脂牛奶-聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测表明，这些截短突变体具有蛋白水解酶活性。纸片试验表明，这些缺失突变蛋白在测定条件下具有杀藻活性。

项目成果

加藤純一, 李宣沃, 大竹久夫, 満谷淳: "赤潮を殺藻する海洋性細菌とその活用をめざした基礎研究"月刊 海洋. 号外No.35. 155-159 (2003)

加藤纯一、李宣和、大竹久男、三谷淳：“杀死赤潮的海洋细菌及其利用的基础研究”月刊特刊第 35 期。155-159 (2003)

加藤純一, 他3名(分担執筆): "環境修復と有用物質生産-環境問題へのバイオテクノロジーの利用-"シーエムシー出版. 55-62 (2003)

Junichi Kato，其他 3 人（贡献者）：“环境恢复和有用物质的生产 - 利用生物技术解决环境问题 -”CMC Publishing 55-62 (2003)。

加藤純一, 李宣沃, 大竹久夫, 満谷淳: "赤潮を殺藻する海洋性細菌とその活用をめざした基礎研究"号外 No.35. 155-159 (2003)

加藤纯一、李宣和、大竹久雄、三谷淳：“针对赤潮杀藻剂的海洋细菌的基础研究及其利用”附本第 35. 155-159 (2003)

Junichi Kato, et al.: "Isolation, characterization, and application of marine bacteria which lyse red tide algae"Monthly Kaiyo (Japanese). No.35. 155-159 (2003)

加藤淳一 (Junichi Kato) 等人：“溶解赤潮藻类的海洋细菌的分离、表征和应用”月刊 Kaiyo（日语）。