電子顕微鏡ならびに原子間力顕微鏡による細胞膜微細構造解析

使用电子显微镜和原子力显微镜分析细胞膜微观结构

• 批准号: 14570021
• 负责人: 藤本 和
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Fukui Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14570021/
• 关键词: 電子顕微鏡; 原子間力顕微鏡; 凍結割断; 細胞膜; 生体膜; 免疫細胞化学; プルキンエ細胞; グルタミン酸受容体

平成14年度は試料作製法の実際的な手技を確立することを目的に研究を行った.A.メッシュの仕様,レプリカの回収と電子顕微鏡観察について1.単孔メッシュにフォルムバール支持膜を張り,炭素蒸着を施すことによって補強した.2.白金ならびに炭素蒸着したレプリカ面が支持膜に接着するように上記のメッシュでレプリカを回収する.3.膜の疎水性面の観察:レプリカを透過型電子顕微鏡で,極低倍から高倍率まで,種々の倍率で観察,写真撮影を行う.B.原子間力顕微鏡観察法について1.洗浄したカバーグラスに蒸留水を一滴たらし,その水滴にTEM観察した単孔メッシュを浮かべる.水を濾紙で吸い取り,乾燥させて,単孔メッシュをガラス面に付着させる.ついで,フォルムバール膜をガラス面に残すようにして,単孔メッシュを取り除く.フォルムバール膜に付着したレプリカ膜(生体膜monolayer)の親水性表面を走査プローブ顕微鏡エクスプローラ(現有機器)で観察する.C.電子顕微鏡ならびに原子間力顕微鏡による同一部位観察の試みについてグルタミン酸受容体δの免疫標識を行ったラット小脳のレプリカの観察結果を以下に記す.透過電顕観察によって,免疫標識がプルキンエ細胞シナプス後膜のE面に認められた.同一部位を原子間力顕微鏡で見出すことは可能であった.高倍率観察によって直径10nm程度の粒状構造がシナプス後膜の表面に密集して存在していることが明らかになった.標識に使用コロイド金粒子の径が10nmであったために,膜表面粒子との識別は困難であった.本結果より,電子顕微鏡ならびに原子間力顕微鏡による同一部位観察は可能であることが明らかになった.

Pp.47-53 14 year は sample method for の be interstate な manipulation を establish す る こ と を purpose に を line っ た. A. メ ッ シ ュ の others, レ プ リ カ の back 収 と electronic 顕 micromirror 観 examine に つ い て 1. Youdaoplaceholder0 holes メッシュにフォ メッシュにフォ ムバ ムバ 単 support membrane を sheet, carbon steaming を application す す とによって reinforcement た た 2. Platinum ならびに carbon is steamed on the たレプリカ surface of the が support film に, and then するように is marked with <s:1> メッシュでレプリカを and reprinted する.3. Waterborne surface membrane の 疎 の 観 examine: レ プ リ カ を type through electronic 顕 micromirror で, extremely low power か ら high-magnification ま で, kind of 々 の ratio で 観, photo of shadow line を う. B. Interatomic force 顕 micromirror 観 examine method に つ い て 1. Incorporated し た カ バ ー グ ラ ス に steamed leave the water を drop た ら し, そ の droplets に TEM 観 examine し た 単 hole メ ッ シ ュ を floating か べ る. Water を filter paper take り で い absorption, dry さ せ て, 単 hole メ ッ シ ュ を ガ ラ ス face the に pay さ せ る. つ い で, フ ォ ル ム バ ー ル membrane を ガ ラ に ス surface residual す よ う に し て, 単 hole メ ッ シ ュ を り except く. フ ォ ル ム バ ー ル membrane に pay the し た レ プ リ カ membrane (body monolayer membrane) の hydrophilic surface を walkthrough プ ロ ー ブ 顕 micro mirror Youdaoplaceholder0 スプロ スプロ ラ ラ(existing machine)で観 cha する.C. Electronic 顕 micromirror な ら び に interatomic force 顕 micromirror に よ 観 was made in the same part る の try み に つ い て グ ル タ ミ ン acid by delta の let body immune marking line を っ た ラ ッ ト small 脳 の レ プ リ カ の 観 examine results under を に す. Through electrical 顕観 observation of によって, immune markers がプ キ キ エ エ the シナプス posterior membrane of エ cells に E surface に recognize められた. Same parts を interatomic force 顕 micromirror で shows す こ と は may で あ っ た. High-magnification 観 examine に よ っ て diameter 10 nm level の granular structure が シ ナ プ ス membrane surface に の after intensive し て exist し て い る こ と が Ming ら か に な っ た. The identification of に uses コロ コロ ド ド gold particles with a diameter of が10nmであったために, and the identification of particles on the film surface と <s:1> is difficult であった. This result よ り, electronic 顕 micromirror な ら び に interatomic force 顕 micromirror に よ 観 was made in the same part る は may で あ る こ と が Ming ら か に な っ た.

项目成果

Makino A, et al.: "Cinnamycin (Ro 09-0198) promotes cell binding and toxicity by inducing transbilayer movement"J.Biol.Chem.. 287. 3204-3209 (2003)

Makino A 等人：“肉桂霉素 (Ro 09-0198) 通过诱导跨双层运动促进细胞结合和毒性”J.Biol.Chem.. 287. 3204-3209 (2003)

Fujimoto, K.: "Membrane lipid distribution revealed by freeze-fracture replica and freeze-substitution labeling"The 15th International Congress on Electron Microscopy Proceedings. 2. 127-128 (2002)

Fujimoto, K.：“通过冷冻断裂复制品和冷冻替代标记揭示的膜脂质分布”第 15 届国际电子显微镜大会论文集。