潰瘍性大腸炎における粘膜上皮再生障害機序に関する分子生物学的検討

溃疡性结肠炎黏膜上皮再生障碍机制的分子生物学研究

• 批准号: 14570513
• 负责人: 中村 哲夫
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Tokyo Medical University (2003-2004)Tokyo Women's Medical University (2002)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14570513/
• 关键词: Reg 1α; 炎症性腸疾患; EXTL3; 潰瘍性大腸炎; Reg 1-α; DSS腸炎

我々は、Reg 1-αが障害腸粘膜の再生治癒に重要な分子である事を示した。今回、大腸上皮培養細胞(HT-29)を用いて、アポトーシス誘導刺激に対するReg 1-αの作用、およびReg 1-αのレセプターとして同定されたEXTL-3の炎症部大腸粘膜上皮における発現を検討した。方法として、1nM,10nMの組み換え型Reg1α蛋白存在下、非存在下に3mM過酸化水素水添加条件でHT-29を培養し、アポトーシスを起こした細胞の割合、およびCaspase-3活性を測定した。UC炎症部、非炎症部および正常の大腸生検材料より上皮を剥離しRNAを抽出し、real-time PCR法にてEXTL-3mRNA量を定量した。結果、過酸化水素水添加によるHT-29のアポトーシス誘導は、1nM,10nMのrh Reg1α存在下で非存在下と比較し約50%抑制され、Caspas-3活性も約50%抑制された。EXTL3/GAPDH比の平均値はUC炎症部の上皮で0.19,UC非炎症部の上皮で0.21,正常上皮で0.53であり、UC炎症部の上皮では、12例中4例でEXTL-3mRNAは検出感度以下であった。以上、Reg1αは、大腸上皮細胞に対する抗アポトーシス作用により、炎症部大腸粘膜の損傷治癒に重要な役割を果たし、UC炎症部の上皮再生障害にReg1α-EXTL糸の異常が関与している可能性が示唆された。また、最近、Reg1-αが癌抑制遺伝子であるとする報告が散見される。そこで、慢性炎症を素地とした発癌過程(colitic cancer)においてReg 1-αが癌抑制遺伝子として機能しているか否かをReg 1-αノックアウトマウスを用いて検討した。BALB/Cマウス(Ct)とReg 1-αノックアウトマウス(KO)で3% Dextran sodium sulphate(DSS)飲水1W後、1W休薬のサイクルを3クールにて慢性腸炎モデルを作製し、前癌病変とされるaberrant crypt foci(ACF)の数を比較検討した。全結腸当たりのACF数は、Ct:2.6±1.2(mean±S.D.)に対してKO:5.2±2.3(mean±S.D.)であった。さらに、DSS飲水1W後、2W休薬のサイクルを9クールにて大腸発癌モデルを作製し、検討した。Low Grade Dysplasin, High Grade Dysplasia, Carcinomaは、Ct群でそれぞれ、36%,16%,8%みられたのに対して、KO群では14%,26%,32%みられ、Reg 1-αが慢性炎症を素地とした発癌過程において、癌抑制遺伝子として働いている事が示された。

Reg 1-α is an important molecule in healing intestinal mucosa regeneration. To investigate the effects of Reg 1-alpha on the development of intestinal mucosa epithelium in the inflammatory region of EXTL-3 by medium and medium induction stimulation of HT-29 cells. Methods Cell cleavage and Caspase-3 activity were measured in the presence and absence of HT-29 and 3mM peracidified water. Extl-3mRNA was quantified by real-time PCR after epithelial dissection of UC inflammatory, non-inflammatory and normal colorectal tissues. The results showed that HT-29 was inhibited by 50% in the presence of 1nM and 10nM of rhReg 1α in the presence of peracidified water. Caspas-3 activity was inhibited by 50% in the absence of rhReg 1α. ExTL-3/GAPDH ratio was 0.19 in UC inflammatory epithelium, 0.21 in UC non-inflammatory epithelium, 0.53 in normal epithelium, 0.21 in UC inflammatory epithelium, 4 in 12 cases. The above results indicate that Reg1α-EXTL plays an important role in the anti-tumor effect of colorectal epithelial cells, the important role in the healing of intestinal mucosa injury in inflammatory part, and the possibility of abnormal Reg1α-EXTL in epithelial regeneration in UC inflammatory part. Recently, Reg1-α has been reported as a cancer suppressor gene. In addition, chronic inflammation can cause cancer (colitic cancer), and the function of Reg 1-α in cancer suppression can also be used. BALB/C (Ct) Reg 1-α (KO) 3% dextran sodium sulphate(DSS) After drinking water for 1W, 1W ACF count of whole colon:2.6±1.2(mean± S.D.)に対してKO:5.2±2.3(mean±S.D.)であった。After drinking water for 1W, DSS will stop drinking water for 2W. Low Grade Dysplasin, High Grade Dysplasia, Carcinoma, Ct group, Ct group, Ct group

项目成果

N.Yamagish, T.Nakamura et al.: "Clinical and Colonic investigation of skipped periappendiceal lesions in ulcerative Colitis"Scand. J. Gastroenterology. 37(2). 177-182 (2002)

N.Yamagish、T.Nakamura 等人：“溃疡性结肠炎中跳过的阑尾周围病变的临床和结肠调查”Scand。

中村哲夫: "炎症性腸疾患とアポトーシス"医学のあゆみ. 205(10). 783-787 (2003)

Tetsuo Nakamura：“炎症性肠病和细胞凋亡”医学史 205(10)。

Y.Tsukada, T.Nakamura et al.: "Cytokine profile in Colonic Mucosa of Ulcerative Colitis Correlates with Disease Activity and Response to GCAP"Am. J. Gastroenterology. 97. 2820-2828 (2002)

Y.Tsukada、T.Nakamura 等人：“溃疡性结肠炎结肠粘膜中的细胞因子谱与疾病活动性和对 GCAP 的反应相关”Am。