脂肪酸転送酵素CD36のリガンド結合ドメインと機能の組織特異性の研究

配体结合域的组织特异性和脂肪酸转移酶CD36的功能研究

• 批准号: 14570706
• 负责人: 山口 敦美
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14570706/
• 关键词: CD36; Ros3; リン脂質; リン脂質リポソーム; 酸化LDL; 脂肪酸転送酵素; スカベンジャー受容体; 長鎖脂肪酸

CD36、ROS3の機能ドメインのおよびリン脂質との相互作用を、イーストを用いた蛋白発現系を用いて解析するために、全長、細胞外のCD36、Ros3のHis-tagをつけた組み換えDNA,を作製し、イーストで発現させる系を作った。イーストにおいてCD36、ROS3蛋白質を高発現する系スクリーニングした。発現したCD36、ROS3蛋白質を可溶化し、単一蛋白質に精製した。現在、精製したROS3蛋白質を人工膜中に組み込み、膜中のリン脂質との相互作用の解析を進めている。Ros3,CD36全長、細胞外、細胞外のN末側半分、C末側半分のcDNA+His-tagを組み込んだベクターを作製し、大腸菌での発現条件検討を行った。Ros3,CD36の全長の発現レベルは低く、なおかつ不溶性画分に発現した。細胞外領域前半、細胞外領域後半は大量発現をすることがわかった。大部分は不溶性画分に発現するが、Ros3細胞外領域後半は可溶画分と不溶画分が約半々くらいに発現した。グアニジン溶液で可溶化してNiカラムに固定し、ゲル上でグアニジンを除いてrefoldingさせて、可溶化したまま溶出させたものでNMRで解析を進めている。

Function of CD36, ROS3 の ド メ イ ン の お よ び リ ン lipid と の を interaction, イ ー ス ト を with い た protein 発 practice while department を い て parsing す る た め に, length, extracellular の CD36, ROS3 の ihs - tag を つ け み た group in え DNA, を as し, イ ー ス ト で 発 now さ せ る を makes っ た. イ ー ス ト に お い て CD36, high ROS3 protein を 発 now す る department ス ク リ ー ニ ン グ し た. The occurrence of たCD36, ROS3 protein を soluble <s:1>, 単 -protein に refined <s:1> た. Now, the refined し た ROS3 protein を に group in artificial membrane み 込 み, membrane in の リ ン lipid と の interaction の parsing を into め て い る. Ros3,CD36 full-length, extracellular, extracellular <s:1> n-terminal half, c-terminal half cDNA+His-tagを group み込んだベ <s:1> タ タ を を production <s:1>, escherichia coli で strain occurrence conditions 検 for を を row った. The full-length <s:1> of Ros3,CD36 pieces shows レベ く <s:1> low く and なお に insoluble parts に show <s:1> た. The first half of the extracellular domain and the second half of the extracellular domain are characterized by a large number of をする とがわ とがわ った った った った った った った った. Most of the <s:1> insoluble fractions に occur するが, the second half of the <s:1> soluble fraction in the extracellular domain of Ros3 is と, the insoluble fraction is が, and about half of the 々くら に に occur た. グ ア ニ ジ ン solution で solubilization し て Ni カ ラ ム に fixed し, ゲ ル on で グ ア ニ ジ ン を except い て refolding さ せ て, solubilization し た ま ま dissolution さ せ た も の で NMR analytical を で into め て い る.

项目成果

Emoto, K., M.Umeda: "Apoptosis by phosphatidylserine in mammalian cells."Subcell Biochem. 19. 61-77 (2002)

Emoto, K., M.Umeda：“哺乳动物细胞中磷脂酰丝氨酸的凋亡。”Subcell Biochem。

Kato, U. et al.: "A novel membrane protein, Ros3p, is required for phospholipid translocation across the plasma membrane in Saccharomyces cerevisiae"J. Biol. Chem. 277. 37855-37862 (2002)

Kato, U. 等人：“酿酒酵母中磷脂跨质膜转运需要一种新型膜蛋白 Ros3p”。

Makino, A. et al.: "Cinnamycin (Ro09-0198) promotes cell binding and toxicity by inducing transbilayer lipid movement"J.Biol.Chem.. 278. 3204-3209 (2003)

Makino, A. 等人：“肉桂霉素 (Ro09-0198) 通过诱导跨双层脂质运动促进细胞结合和毒性”J.Biol.Chem.. 278. 3204-3209 (2003)

Yamaji-Hasegawa, A., et al.: "Sphingomyelin-dependent oligomerization of pore-forming toxin lysenin."J Biol Chem. 278. 22762-22770 (2003)

Yamaji-Hasekawa, A. 等人：“成孔毒素赖氨酸的鞘磷脂依赖性寡聚化。”J Biol Chem。

Kametaka, S, et al.: "Identification of phospholipid scramblase 1 as a novel interacting molecule with b-secretase (b-site amyloid precursor protein (APP) cleaving enxyme (BACE))."J Biol Chem. 278. 15239-15245 (2003)

Kametaka, S 等人：“将磷脂扰乱酶 1 鉴定为与 b 分泌酶（b 位淀粉样前体蛋白 (APP) 裂解酶 (BACE)）相互作用的新型分子。”《生物化学杂志》。