細胞性粘菌を用いた受精の分子機構に関する研究

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これまでに明らかにした細胞性粘菌Dictyostelium discoideumの有性生殖に関与する細胞表面分子,gp70,及びgp138について解析を進め,次のような成果が得られた。1.gp70,gp138の部分精製:gp70はNC4の膜タンパクを不動化したアフィニティカラムで,gp138はWGAのアフィニティカラムで部分精製することができた。gp138については,二次元電気泳動でさらに精製し,N末端の12アミノ酸の配列を既に決定している。このアミノ酸配列に対応するオリゴヌクレオチドを合成し,それをプロ-ブとして,gp138をコ-ドする遺伝子の単離を試みているところである。2.単クロ-ン抗体の産生:部分精製したgp70及びgp138をBalb/cマウスに免疫感作してその脾臓細胞とミエロ-マp3Ulとを融合させてハイプリド-マを得た。一次スクリ-ニングはいずれも部分精製タンパクを用いたELISAを行なった。(1)抗gp138単クロ-ン抗体:次に述べる三種類の単クロ-ン抗体が得られた。a)ウエスタンブロッティングでgp138を特異的に認識するもの。残念ながらこれらは融合を阻害しない。b)細胞融合を阻害し,ウェスタンブロッティングで多数のバンドを認識するもの。エピト-プは糖と考えられる。c)細胞融合を阻害し,融合能を持つ細胞に特異的に結合するが,抗原がSDSに感受性なもの。非変性電気泳動後ウエスタンブロッティングを行なうと,単一のバンドが検出される。(2)抗gp70単クロ-ン抗体もa),b)二種類が得られた。現在既に得られた単クロ-ン抗体を用いた解析を進める一方で,融合を阻害する特異的な単クロ-ン抗体を得るために両タンパク質の精製,除糖の準備を行なっているところである。