HIVのR遺伝子(vpr)の同定とその機能解析

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1)これまでに報告されているHIV-1の塩基配列を解析し、vpr遺伝子内でよく保存されている領域をいくつか選び、アミノ酸合成機により合成したものを、モルモットに免疫したところ、N末の14アミノ酸を合成したもので良好な抗体が得られた。2)HIV-1の感染性DNAクロ-ンよりvpr遺伝子を切り出し、大腸菌での発現ベクタ-に組込んだ。1)で作成した抗体により12KDのvpr蛋白が大腸菌で発現されていることが確認された。3)Vpr遺伝子を動物細胞での発現ベクタ-に組込み、動物細胞にトランスフェクトしたところ、ウエスタンブロット法により、12KDのvpr蛋白の発現が確認された。vprに発現細胞を各分画に分けて、解析したところvpr蛋白は、細胞膜分画に局在する傾向が認められた。また、HIV-1を感受性細胞株に感染させ、vpr蛋白の発現を調べたところ、ウイルスによるCPE(細胞変性効果)が最も強く認められる時期に一致して、vpr蛋白が検出され、やはり、細胞膜分画に局在する傾向が認められた。4)HIV-2の全塩基配列を決定し、その情報をもとに、感染性DNAクロ-ニおよびそのvpr遺伝子変異株を作成した。HIV-2のvpr遺伝子変異株の増殖性および細胞障害性は、野生株のそれとほとんど区別がつかなかった。5)野生のマンドリルから分離したHIV様ウイルス(SIV_<MND>)の全塩基配列を決定し、解析を行なったところ、SIVHI_<MND>にはvpr遺伝子が存在することが確認された。以上の結果から、HIV-1のvpr遺伝子産物の発現と局在がはじめ2同定され、その発現がPEに関連する可能性が示唆された。HIV-2やSIV_<MND>のvprについては今後検討されるべき課題である。