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HIVのR遺伝子(vpr)の同定とその機能解析

HIV R基因(vpr)的鉴定及其功能分析

基本信息

批准号：
01653503
负责人：
三浦智行
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01653503/
关键词：
ヒト免疫ウイルスサル免疫不全ウイルス HIV SIV vpr 遺伝子感染性クロ-ン

项目摘要

1)これまでに報告されているHIV-1の塩基配列を解析し、vpr遺伝子内でよく保存されている領域をいくつか選び、アミノ酸合成機により合成したものを、モルモットに免疫したところ、N末の14アミノ酸を合成したもので良好な抗体が得られた。2)HIV-1の感染性DNAクロ-ンよりvpr遺伝子を切り出し、大腸菌での発現ベクタ-に組込んだ。1)で作成した抗体により12KDのvpr蛋白が大腸菌で発現されていることが確認された。3)Vpr遺伝子を動物細胞での発現ベクタ-に組込み、動物細胞にトランスフェクトしたところ、ウエスタンブロット法により、12KDのvpr蛋白の発現が確認された。vprに発現細胞を各分画に分けて、解析したところvpr蛋白は、細胞膜分画に局在する傾向が認められた。また、HIV-1を感受性細胞株に感染させ、vpr蛋白の発現を調べたところ、ウイルスによるCPE(細胞変性効果)が最も強く認められる時期に一致して、vpr蛋白が検出され、やはり、細胞膜分画に局在する傾向が認められた。4)HIV-2の全塩基配列を決定し、その情報をもとに、感染性DNAクロ-ニおよびそのvpr遺伝子変異株を作成した。HIV-2のvpr遺伝子変異株の増殖性および細胞障害性は、野生株のそれとほとんど区別がつかなかった。5)野生のマンドリルから分離したHIV様ウイルス(SIV_<MND>)の全塩基配列を決定し、解析を行なったところ、SIVHI_<MND>にはvpr遺伝子が存在することが確認された。以上の結果から、HIV-1のvpr遺伝子産物の発現と局在がはじめ2同定され、その発現がPEに関連する可能性が示唆された。HIV-2やSIV_<MND>のvprについては今後検討されるべき課題である。

1) HIV-1 gene sequence analysis, vpr gene preservation, domain selection, acid synthesis, immunization, terminal 14 acid synthesis, and good antibody production were reported. 2)HIV-1 infectious DNA, E. coli, and the development of viral DNA. 1) The antibody was prepared and the 12KD vpr protein was detected in E. coli. 3) The expression of Vpr protein in animal cells was confirmed by PCR, and the expression of 12KD Vpr protein in animal cells was confirmed by PCR. vpr protein expression in cell membrane and protein expression in cell membrane HIV-1 infection, vpr protein expression, CPE(cellular protein), and cpe(cellular protein) are most strongly recognized at the same time, vpr protein expression, vpr protein expression, and cpe protein expression. 4)HIV-2 gene sequence determination, information transfer, infectious DNA detection, and generation of VPR gene variants. HIV-2 is a virus that can cause cell damage to plants and wild plants. 5)The wild type of virus isolated from the virus (SIV_<MND>) was identified by determining, analyzing, and identifying the presence of the virus<MND>. The above results demonstrate the possibility that the development of HIV-1 vpr gene products is related to the development of HIV-2. HIV-2 and SIV_<MND>vpr issues are discussed in the future.