权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

魚類主要組織適合性抗原遺伝子の探索と分析

鱼类主要组织相容性抗原基因的检索与分析

基本信息

批准号：
02206207
负责人：
酒泉満
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02206207/
关键词：
MHC メダカクロ-ニング

项目摘要

魚類のMHCの遺伝子は、哺乳類のMHC遺伝子をプロ-ブとしたクロスハイブリダイゼ-ションによってはつかまえることができなかった。しかし、ヒト、マウス、ニワトリのMHC遺伝子を比較すると、システインの近傍だけが強く保存されていることが分る。そこで2カ所のシステイン領域に対するプライマ-を作製し、メダカのゲノムDNAを鋳型としてPCR法を行い、これらのプライマ-に挟まれた遺伝子を増幅させた。その結果、哺乳類のMHCクラスII遺伝子と50〜60%の相同性を示す、約190bpのメダカの遺伝子断片が3種類得られた。これら3種の遺伝子断片同士の相同性も50〜60%であった。この3者の関係が同じ遺伝子座に存在する別の対立遺伝子であるのか、あるいは別の遺伝子座に乗っている遺伝子であるのかは現在のところ不明である。次に、近交系メダカHB32CとHO4CとのF1からmRNAを精製し、λgt10をベクタ-としてcDNAライブラリ-を作製した。このcDNAライブラリ-をメダカのMHCクラスII様遺伝子断片をプロ-ブとしてスクリ-ニングしたが、陽性シグナルを得ることはできなかった。そこで近交系メダカHO4CのmRNAからcDNAを合成したのちPCR法を行ったところ(リバ-スPCR法)、ゲノム遺伝子の場合と同様190bpの遺伝子断片の増幅がみられた。したがって、メダカのMHCクラスII様遺伝子配列をもつ遺伝子が発現している可能性が高いものと考えられる。リバ-スPCR法によって増幅された190bp遺伝子断片をプロ-ブとしてcDNAライブラリ-をスクリ-ニングしたところ、81個の陽性シグナルが得られた。現在、この陽性シグナルのセカンドスクリ-ニングならびに、リバ-スPCR法によって増幅された遺伝子断片のクロ-ニングおよびシ-クエンスを行っている。

Fish MHC genes, mammals MHC genes, milk MHC genes The MHC gene is closely related to the gene expression, and the gene expression is closely related to the gene expression. 2. DNA typing and PCR amplification in the field of gene expression The results showed that 50 ~ 60% identity of mammalian MHC gene II fragments was obtained, and 3 species of MHC gene fragments with about 190bp were obtained. The identity of the three genetic fragments is 50 ~ 60%. The relationship between the three is the same as that between the two. The relationship between the three is different. The relationship between the two is unknown. In addition, the inbred line HB32C and HO4C were purified and the cDNA sequence was controlled. The cDNA fragments of the MHC gene II were extracted from the cDNA fragments. In the case of the same 190bp cDNA fragment, PCR was used to synthesize the mRNA and cDNA of the inbred line HO4C. The probability of occurrence of MHC II gene is high. The 190bp cDNA fragment was amplified by PCR and 81 positive fragments were obtained. Now, this positive gene fragment is being developed using the Riva-SPCR method to increase the size of the gene fragment.