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ネコ免疫不全ウイルスによるエイズの動物病態モデルの確立とその解析

猫免疫缺陷病毒引起的艾滋病动物病理模型的建立与分析

基本信息

批准号：
02235204
负责人：
見上彪
金额：
$ 1.86万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究はネコ免疫不全ウイルス(FIV)とネコの系により,Eトエイズの発症モデルを確立することを最終目標とする。本年度はFIVの遺伝子クロ-ニング,シ-クエンス,蛋白の発現を検討した。1)FIVの遺伝子クロ-ニングと感染性遺伝子クロ-ンの作製:我々が分離したFIV TM株の完全長と考えられる遺伝子クロ-ンを得て、制限酵素地図を作製し,アメリカで分離クロ-ニングされたア株と比較したところ,両株は大きく異っていた。またFIVのLTRの塩基配列を比較したところ,日本で分離されたFIV株とアメリカで分離された株の間には顕著な差が見られた。作出した遺伝子両側にLTR構造を取るように遺伝子組換えを行ないFIV TM株の感染性遺伝子クロ-ンを得た。このクロ-ン由来のウイルスはIn vivo,In vitroにおいて感染性を有することが示された。2)FIV TM株の全遺伝子配列の決定とFIVのgag蛋白発現:FIV TM2株の遺伝子配列を決定し,オ-プンリ-デイングフレイム(Orf)を調ベた。その結果,gag,pol,envのorfの他にpolとenvの間の中央領域にvifに相当するorfとシステインリフチ領域を含むorfAが,またenvのすぐ下流にはアルギニンリッチ領域を含くむorfBが見られた。また、FIVのgag蛋白を大腸菌に発現させ,ELISAによる抗FIVgag抗体検出の系を確立した。3)ネコCD4遺伝子のクロ-ニンングと発現:完全長と思われるネコCD4遺伝子発現プラスミドを作製し,COS細胞でのトランジエントな発現を抗ネコCD4単クロ-ン性抗体で調べたところ,約13%の細胞がネコCD4陽性となり,蛍光強度も比較的強いものであった。

This study aimed to establish the mechanism of immune deficiency syndrome (FIV). This year, the FIV gene expression and protein development were discussed. 1) The production of FIV gene and infectious gene: I isolated FIV TM strain from the complete length of the gene and obtained the gene and restricted enzyme production, and isolated FIV TM strain from the complete length of the gene. The gene alignment of FIV was compared with that of FIV in Japan. To make the LTR structure on the side of the virus, to select the virus sub-group, to carry out the infectious virus of the FIV TM strain. In vivo, in vitro, in vivo, in vitro, in vitro,In vivo, in vitro, in 2)FIV TM strain gene sequence determination and FIV gag protein discovery:FIV TM strain gene sequence determination, and FIV TM2 strain gene sequence (Orf) modulation. As a result,gag,pol,env, orf, pol, env, env. The FIV gag protein was detected in E. coli, and the ELISA system for anti-FIV gag antibody detection was established. 3) CD4 gene expression and detection: complete growth and development of CD4 gene expression and detection of anti-CD4 monoclonal antibody in COS cells, about 13% of cells were CD4 positive, and the intensity of light was relatively strong.