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神経伝達物質放出の制御における細胞骨格及びその調節系の関与

细胞骨架及其调节系统参与控制神经递质释放

基本信息

批准号：
06253203
负责人：
櫻井隆
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

神経伝達物質放出のモデルとされている副腎髄質クロム親和細胞において、細胞膜直下のアクチンフィラメントが分泌刺激時に細胞膜と融合する分泌顆粒の数を調節している可能性が示唆されている。Trifaroは一連の研究により副腎髄質クロム親和細胞においてはscinderin(アドセバリンと同一の蛋白)が、Ca^<2+>・イノシトールリン脂質依存性にアクチンフィラメントの構造変化を引き起こしていることを示してきた。我々はアドセバリンのcDNAクローンを利用することにより、遺伝子工学的にアドセバリンの発現量を変化させ、この蛋白質の分泌量調節における生理的機能を検討することを計画した。遺伝子工学的操作の難しい初代培養のクロム親和細胞ではなく、ラット由来の株化細胞であるPC12において検討を行うために、ウシアドセバリンcDNAをプローブとしてラット腎のcDNAライブラリーをスクリーニングし、ラットアドセバリンの3′側に相当するcDNAクローンを得た。さらに、この塩基配列をもとに5′RACE法により全長のcDNAクローンを得た。現時点までに全長の塩基配列を決定し終わっている。顆粒と細胞膜のドッキング以降Ca^<2+>濃度の上昇により膜の融合にいたる過程は解明されつつあるが、このドッキングに至る直前の過程は各種のセカンドメッセンジャーの作用により分泌量を制御している可能性がある点で重要と考えられるが未だ十分には解明されていない。アクチンフィラメント系はいろいろな面からこれらの過程に関与していると考えられるが、このフィラメントの構造をCa^<2+>・イノシトールリン脂質依存性に変化させるアドセバリンのはこの調節系の重要な因子の候補の1つと考えられる。得られたcDNAを利用しアンチセンスDNAまたはRNAによりその発現を抑えた場合の影響を現在PC12細胞において検討中である。

The possibility of regulating the number of secretory granules in the cell membrane and fusion during secretion stimulation is suggested. Trifaro's ongoing research has shown that the structural transformation of paranephric protein-compatible cells is caused by the Scinderin, Ca^<2+>·We plan to explore the physiological function of the protein secretion regulation in order to change the expression of the protein in gene engineering and the utilization of the cDNA library of the protein. The operation of gene engineering is difficult in the primary culture of compatible cells. The cDNA of PC12 is obtained from the cDNA of kidney on the 3′ side of the cell line derived from the cell line. The 5′RACE method was used to identify the full-length cDNA. At present, the total length of the matrix is determined. The process of membrane fusion by decreasing Ca^<2+> concentration in particle and cell membrane is explained. The process before membrane fusion is explained. The possibility of controlling secretion is discussed. The structure of the lipid dependent system is related to the process of the regulation of the lipid dependent system. The results showed that the expression of cDNA in PC12 cells was influenced by the expression of RNA.