植物における熱ストレス応答の分子遺伝学的解析

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シロイヌナズナHSP90ファミリー遺伝子の機能を解析するため、まず発現調節因子を検索した。一般にSouth-Western法を用いて研究されるが、ここではよりin vivoを再現する系として酵母細胞中での相互作用を用いた。1)HSP81プロモーターをレポーター遺伝子に結合させ、酵母細胞中に導入して遺伝子発現を調べた。その結果、常温でもHSP81-1遺伝子が高い活性を示した。2)常温での発現が酵母細胞中で低いHSP81-2遺伝子を用いて、転写上昇を引き起こすシロイヌナズナcDNA断片を検索した。その結果、200,000クローンから20クローンを選択した。3)まず、8クローンを詳細に発現解析した。HSP81-2遺伝子と同様な組織特異性を示したクローン♯108、♯101とロゼット葉で発現するクローン♯102、♯105を同定した。4)これらのクローンの塩基配列を決定した。クローン♯105はレセプター型のプロテインキナーゼと相同性もう示した。5)活性の更なる上昇を同定するために、レポーター遺伝子をヒスチジン合成酵素遺伝子に換えたプラスミドを用いても検索し始めた。6)2-hybrid systemで相互作用が同定できるかを検討した。