ドーパミントランスポーターのパーキンソン病誘発神経毒MPP+認識領域の解析

帕金森病诱发神经毒素MPP+多巴胺转运蛋白识别区分析

• 批准号: 06272224
• 负责人: 北山 滋雄
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06272224/
• 关键词: ドーパミントランスポーター; パーキンソン病; MPP^+; 神経毒; 選択的神経細胞死; 神経伝達物質再取込み機構; アミノ酸点変異; COS細胞遺伝子導入発現系

パーキンソン病誘発神経毒MPP^+(1-methyl-4-phenylpyridinium)は神経伝達物質再取り込み機構により神経終末に取り込まれ、ドーパミンニューロンの選択的細胞死を招く。本研究ではドーパミントランスポーターにおける輸送活性の可逆性という点から我々がこれまでに示した第7膜貫通部分のセリン残基に焦点を当て[^3H]MPP^+輸送とMPP^+被爆による細胞死について検討を加えた。[^3H]MPP^+取り込みはドーパミンと較べるとゆっくりとした時間経過で細胞内に取り込まれる。そのinitial velocityの分析から第7膜貫通部位serine350,353をalanineに点変異した7S-A2ミュータントはK_m値を変えることなくV_<max>を増加させた。一方[^3H]MPP^+結合はB_<max>を変えずK_D値の増大がみられた。予め負荷した[^3H]MPP^+のトランスポーターを介した細胞外への流出は7S-A2ミュータントで増加していた。以上の結果をあわせ考えると、7S-A2ミュータントではMPP^+輸送のトランスロケーションの促進と共に、トランスポーターが細胞内にオリエンテーションされた状態でのMPP^+に対する親和性も変化しているのかもしれない。WST-1を用いた光学的マイクロプレートアッセイによる生細胞数測定からドーパミントランスポーター発現COS細胞は比較的低濃度のMPP^+により細胞数の減少、すなわち細胞障害を生じた。この評価法を用いれば簡便に多量のサンプルの細胞毒性スクリーニングが行えるものと思われる。7S-A2ミュータントトランスポーター発現COS細胞ではそのMPP^+取込み能の高進に反してMPP^+毒性感受性は野性型トランスポーター発現COS細胞よりも低下していた。このことは初期のMPP^+取込み増加よりもむしろ長時間の被爆におけるトランスポーター可逆性に関連する細胞内外の再分布がMPP^+細胞毒性の重要な因子となるかもしれない可能性を示唆しており今後さらに検討を加える必要があるものと思われる。

If you are sick or sick, you will not be sick or sick. (1-methyl-4-phenylpyridinium) you will have to use the computer system to select the information that you have selected. The purpose of this study is to show that the seventh membrane is the focus of the seventh membrane. [^ 3H] MPP^ + is sent to MPP^ +. The results show that the 7th membrane is the focal point of the 7th membrane. [^ 3H] MPP ^ + was used to retrieve the data from the cell. The initial velocity analysis showed that the seventh membrane was connected to serine350353, alanine, 7S-A2, K _ m, K _ m and V _ & lt;max>. One side [^ 3H] MPP ^ + is combined with the exact size of the maxillogram. Give an extra dose of [^ 3H] MPP ^ + pregnancy to introduce the extracellular flow out of 7S-A2 and add it. The above results show that the status of MPP ^ + is significantly higher than that of 7S-A2. The results of the above results show that MPP ^ + is required to improve the overall performance of MPP ^ +. WST-1 uses the optical system to determine the number of cells in the system. The number of cells in the COS is much lower than the number of cells in the system. The method was used to determine the amount of cytotoxicity in the stool. 7S-A2 can improve the level of anti-COS, anti-MPP, virulence, wild-type, wild-type, low-level, low-level COS cells. The possibility of redistribution of MPP^ + cytopathic acid, which is an important factor in cytotoxicity, indicates that it is necessary to think about the possibility of redistribution of MPP^ + cell toxicity after a long period of time when it was exploded for a long time.