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アクチン・ミオシン頭部複合体の結晶化とX線回析

肌动蛋白-肌球蛋白头复合物的结晶和X射线衍射

基本信息

批准号：
07224206
负责人：
若林克三
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は筋収縮のエネルギー変換を蛋白質の分子構造に立脚して理解するために、最小単位であるアクチンとミオシン頭部の単量体コンプレックスを調製し、その結晶化とX線結晶構造解析ならびに溶液X線散乱による溶液構造解析を併用してエネルギー変換中のアクトミオシン分子の構造解明を目指した。昨年度はG-アクチンを二価性架橋剤マレイミドベンゼン酸エステル(MBS)処理後、さらにサブドメインIIのチロシン53をジアゾニウムテトラゾル(DHT)で化学修飾した結果、ファロイジンを作用させても全く重合しないがミオシンと結合するアクチンモノマーを調製し、MBSによりアクチンとミオシン頭部S1との1:1架橋複合体を形成させることに成功した。今年度は架橋複合体と可逆結合したアクチンモノマー・S1複合体のX線溶液散乱実験をし、原子モデルを構築した。架橋複合体のX線溶液散乱実験から算出した分子の形態を表す慣性半径はS1単独(40オングストローム)より著しく大きく、約60オングストローム、原子散乱強度から求めた分子量は300kDa近くあり、推定分子量(150kDa)の約2倍あり比較的高濃度蛋白溶液中では複合体ダイマーと考えられた。一方混合して可逆的に強く結合したアクチン-S1複合体のみの散乱強度分布は遊離アクチン、S1を補正すると混合モル比に関係せず一致した。算出した慣性半径は50オングストローム、分子量150kDa、最大分子コード長は180オングストローム、アクチン-S1重心間距離70-80オングストロームとなった。これらを指標にしてアクチン、S1の原子座標を用いて散乱強度分布を最適化するドッキングモデルをコンピューターにより探索したところ、S1先端近くにアクチンが結合することが確定した。しかし完全な一致は得られないので、この違いが何によるのか水分子の配位、ドメイン間内部運動などモデル起算により検討している。以上、現在までアクチン・ミオシン複合体モノマーの結晶化には至っていないが、これらの試料のX線溶液散乱実験はかなり進展した。現在結晶化を精力的に押し進めている。

The molecular structure of protein is understood by the method of crystallization, X-ray crystal structure analysis, solution X-ray scattering and solution structure analysis. After the treatment of G-linked binary bridging agent (MBS), the chemical modification (DHT) was successfully performed to form the 1:1 bridging complex of the head S1 and the head S2. X-ray solution scattering of this year's bridge complex and reversible binding of S1 complex and atomic structure X-ray solution dispersion of bridging complex was calculated by molecular morphology, inertial radius was S1 (40 kDa), atomic dispersion strength was calculated by molecular weight was 300kDa, molecular weight was estimated to be about 2 times (150kDa), and molecular weight was calculated by molecular morphology. The intensity distribution of scattering in a reversible mixture is consistent with that in a mixed mixture. Calculate the inertia radius of 50 ° C, molecular weight of 150kDa, maximum molecular length of 180 ° C, distance between centers of gravity of 70-80 ° C. The atomic coordinates of S1 are used to optimize the scattered intensity distribution. The atomic coordinates of S1 are used to optimize the scattered intensity distribution. The atomic coordinates of S1 are used to optimize the scattered intensity distribution. The atomic coordinates of S1 are used to optimize the scattered intensity distribution. The coordination of water molecules and the internal motion of water molecules are completely consistent. The crystallization of the above complex is progressing in the X-ray solution dispersion of the sample. Now the crystallization of energy is committed to the future.