プロテオリポソームを素構造とした結晶化薄膜の作製

具有脂蛋白体基本结构的结晶薄膜的制备

基本信息

  • 批准号:
    07241217
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.22万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    1995
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1995 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

素構造であるバクテリオロドプシン(bR)のプロテオリポソームを各種のアルキル鎖長を持つ脂質(DLPC,DMPC,DPPC,DSPC)を用いて作製した。具体的には、1)紫膜から界面活性剤を用いて再構成、または2)球殻状構造体からリポソームに融合して再構成を行った。作製したプロテオリポソームでプロトンポンプ活性を確認した。プロテオリポソーム上でのbRの構造を円二色性(CD)分散計及び透過型電子顕微鏡を用いて解析した。bR内のレチナ-ルに由来するCDスペクトルは脂質の種類に依存して温度相転移を示し、脂質の相転移温度が低いものほど蛋白質の会合が低温で生じるという結果が得られた。DMPCプロテオリポソーム試料を急速凍結して膜の割断面を電子顕微鏡により観察したところ、その会合体は3量体であり、分散して存在していることがわかった。相転移温度より低温では、DMPCプロテオリポソーム試料に高濃度の塩(〜4M、NaCl)を添加すると、膜内にbRの2次元結晶が観測され、CDスペクトルにも顕著な変化が見られた。その格子定数は約10nmで、以前報告された値より1割程度大きかった。DPPCプロテオリポソームでは、結晶化は起こらずCDスペクトルにも顕著な変化が見られなかった。相転移温度より十分高い温度では、構成脂質によらずNaCl濃度に依存してCDスペクトルの変化が見られた。bR球殻状構造体では、膜状に高度に配向したbRが密に存在し、そのCDスペクトルに弱い温度依存性が観測された。球殻状構造体には逆プロトンポンプ活性が存在し、その形状が非常にそろっている。それを素構造とし、水サブフェイズ法を用いてその2次元結晶を作製中である。
It has been made that all kinds of consumer fat (DLPC,DMPC,DPPC,DSPC) can be used as a substitute for all kinds of health care products (bR). The specific structure, 1) the purple membrane, the interface activity of the purple membrane, and the globular structure of the purple membrane, 1) the interfacial activity of the purple membrane, 1) the purple membrane, the interface activity of the purple membrane, and 2) the globular structure. Please confirm that you are active. Use bR to analyze the dispersion of dichroism (CD) and transmission electron micrometer. The reason for the change in bR is that it depends on the temperature phase shift, the temperature, the temperature, the temperature and the temperature. The DMPC equipment is used for rapid measurement of the membrane cutting cross-section. The electron micrograph is used to measure the temperature of the film. The micrometer is used to measure the weight of the body and the dispersion is measured. The phase transfer temperature is low temperature temperature, the DMPC temperature is high temperature temperature, the temperature is high temperature (~ 4m, NaCl), the second order crystal structure of the film is bR, and the CD temperature is different. The fixed number of grids is about 10nm, and the previous report shows that there is a large degree of cutting. The DPPC system is very sensitive, and the results show that the CD effect is very important. The phase shift temperature is very high, the temperature is very high, and the formation of fat is dependent on the temperature of NaCl. The temperature is very high. The temperature is very high. BR globular structure, membrane height, bR, CD, temperature dependence, temperature dependence, temperature dependence. The globular structure is very active, and the shape is very strong. In this paper, we use the two-dimensional crystal structure of the two-dimensional structure to make the data in the middle of the experiment.

项目成果

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专著数量(0)
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专利数量(0)
K.Nagayama,S.Takeda,S.Endo and H.Yoshimura: "Fabricaiton and Control of Two-Dimensional Crystalline Arrays of Protein Molecules" Jpn.J.Appl.Phys.34. 3947-3954 (1995)
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    0
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S.Takeda,H.Yoshimura,S.Endo T.Takahashi,and K.Nagayama: "Control of Crystal Forms of Apoferritin by Site-directed Mutagenesis" Proteins. 23. 548-556 (1995)
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  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
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Tsutomu Kamiyama:“结晶膜蛋白的新方法”日本物理学会杂志 50. 39-42 (1995)。
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