好塩性分子シャペロンに関する研究

嗜盐分子伴侣的研究

• 批准号: 07253221
• 负责人: 徳永 正雄
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07253221/
• 关键词: 好塩菌; 熱ショック; 分子シャペロン; GroEL; DnaK

当研究室では、塩田、塩蔵食品、醤油もろみ、海岸の朽ち木等から独自に多種類の好塩細菌を分離、保存しており、生育に2.5M以上の食塩を必要とする高度好塩菌と、0.5-2.5M食塩を要求する中度好塩菌に大きく分類できる。このような、特殊環境下での蛋白質のfoldingと熱ショック蛋白質の性質に興味をもち、これら、好塩菌の熱ショック蛋白質のスクリーニングを行った。方法としては、各種菌株を生育上限温度まで種々変化させた温度条件で生育させ、集菌後、菌体破砕、遠心分離で粗抽出液を調製し、直接、もしくは、ATPカラムにかけその吸着画分をそれぞれSDS-PAGEにかけ蛋白バンドの生育温度に伴う生産量の変化を調べた。その結果、高度好塩菌では生育温度の上昇とともに蓄積量が増加し、生育上限温度付近で最も顕著に蓄積され、しかもATPカラムに結合する蛋白バンドを数種類検出した。一方、種々の菌種に属する中度好塩菌においても、生育温度の上昇とともに生産が増加し、ATPアガロースに吸着する数種のバンドを検出した。顕著に合成量が変化する蛋白バンドについて、SDS-PAGE後、PVDF膜に転写し、N末端アミノ酸配列を調べたところ、Planoooocus属中度好塩菌からは、Bacillus subtilisのGroELと相同の、またAcinetobactor属,Pseudomonas属中度好塩菌からは、E.coliのそれぞれDnaK,GroELと相同のN末端アミノ酸配列を持つ蛋白を同定できた。現在Pseudomonas属中度好塩菌から、GroELホモログを精製し、その性質を検討している。sonication後の粗抽出液より、ATPカラム、DEAEカラム等を用いて均一に精製し、ATPase活性を確認した。非好塩性細菌である大腸菌のGroELとの性質の比較により、好塩菌での蛋白質のfoldingメカニズムを検討していく予定である。

At the laboratory, Shiota, Shiozou Food, Soybean Sauce, and Kaigan Kuchiki, we independently isolate, preserve, and produce various kinds of good bacteria. It is necessary to cultivate high-beneficial bacteria of 2.5M and above, and it is necessary to cultivate high-benefit bacteria of 0.5-2.5M.このような, でのprotein のfolding and とheat ショックprotein properties under special environmentに心丝をもち, これら, 好婩 bacteriaの热ショックproteinのスクリーニングを行った. The method is to use the upper limit temperature of growth of various strains, the growth of various strains, the growth of temperature conditions, after the collection of bacteria, the bacterial cells are broken, the crude extract is prepared by centrifugal separation, and the Pick up, もしくは, ATP カラムにかけその sucking draw points をそれぞれSDS- PAGE にかけprotein バンドのgrowth temperature に companion うproduction volume の変化を Adjust べた. As a result, the growth temperature of highly fertile bacteria has increased, the accumulation amount has increased, and the growth upper limit temperature is approaching There are several kinds of 検出した which are the most common ones, including the accumulation of ATP and the combination of ATP and protein. On the one hand, the species of bacteria are of the genus of moderately good bacteria, and the growth temperature is rising. We produce several kinds of ATP アガロースにするのバンドを検出した. The synthesis amount of the dye is changed and the protein is modified, after SDS-PAGE, the PVDF membrane is written, and the end is N Terminal acid paclitaxel, Planoooocus moderately good bacteria, Bacillus subtilis の GroEL と same の、 ま た Acinetobactor genus, Pseudomonas genus moderately good The same N-terminal acid ligation sequence of E. coli, E. coli DNAK, and GroEL are the same. Currently, Pseudomonas belongs to the medium-friendly bacteria から, GroEL ホモログをrefined し, and その性を検To している. After sonication, the crude extract liquids such as ATP, ATP, and DEAE were homogenized and refined, and the ATPase activity was confirmed. Comparison of the properties of non-friendly bacteria and coliforms, GroEL, and good bacteria, and protein folding of good bacteria.

项目成果

徳永正雄: "酵母における蛋白質輸送・分泌生産" 化学と生物. 33. 427-436 (1995)

Masao Tokunaga：“酵母中的蛋白质运输和分泌生产”化学与生物学 33. 427-436 (1995)。