異種蛋白質の高次構造形成と分泌に関わるBiP/Kar2蛋白の構造と機能

BiP/Kar2蛋白参与外源蛋白高级结构形成和分泌的结构和功能

• 批准号: 06248225
• 负责人: 徳永 正雄
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06248225/
• 关键词: 分泌; 酵母; BiP; KAR2

酵母Saccharomyces cerevisiaeを宿主に用いて異種有用蛋白質の分泌生産を試み、酵母キラー蛋白の分泌シグナルを用いてマウスα-アミラーゼの分泌系を構築してきた。種々の分泌シグナルを用いることにより、分泌効率に違いがみられ、特に、キラープレプロシグナルを用いた場合には発現されたアミラーゼのうち約10%が分泌されただけで、残りの90%は菌体内に留まっていた。これは、アミラーゼの末端アミノ酸配列分析、ショ糖密度勾配遠心による細胞分画、蛍光抗体法などの手法により小胞体に蓄積していることが示された。小胞体内には異常蛋白を分泌させないという品質管理のメカニズムがあり、小胞体内に局在するHSP70であるKAR2遺伝子産物(BiP)がその重要な因子の一つと考えられている。そこで、KAR2遺伝子に種々の変異を導入し、アミラーゼの分泌に対する影響を調べた。まず、染色体KAR2遺伝子の発現をGAL7プロモーターにより調節可能にし、大腸菌mutD株により変異を導入したKAR2遺伝子に依存したアミラーゼの分泌量をでんぷんプレート上のハロ-の大きさで検定した。今までのところ、分泌量が増加した株は見つかっていないが、分泌量の低下した株を数株分離して解析した。また、Kar2蛋白のC末端付近の欠失変異株を作製し、どこまでが細胞の増殖に必要な領域かを検討した。なかで一株温度感受性を示す株を分離し、その構造を明かにした。

The yeast Saccharomyces cerevisiae is used for the production of heterologous useful proteins, and the secretion system of yeast protein is constructed. In the case of seed secretion, about 10% of the total secretion rate was found in the bacteria. The results showed that: (1) the protein content of the protein was higher than that of the protein content of the protein;(2) the protein content of the protein was higher than that of the protein content of the protein. In vivo, abnormal protein secretion and quality control are important factors in the production of KAR2 gene products (BiP). KAR2 gene expression is regulated by different introduction and secretion. The expression of chromosome KAR2 gene is regulated by GAL7 gene. The expression of KAR2 gene is regulated by GAL7 gene. The expression of KAR2 gene is regulated by GAL7 gene. The expression of KAR2 gene is regulated by GAL7 gene. The amount of secretion increased, and the amount of secretion decreased. To investigate the production of mutant plants near the C-terminal region of Kar2 protein and the necessary areas for cell proliferation The temperature sensitivity of a plant is demonstrated by the isolation and structure of the plant.