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Caチャネル調節機構の構造機能相関

Ca通道调节机制的结构-功能关系

基本信息

批准号：
07276230
负责人：
亀山正樹
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07276230/
关键词：
Caチャネルリン酸化 ATP

项目摘要

この研究は、Caチャネルの蛋白キナーゼ(リン酸化)、ATP、細胞内蛋白などによる調節の特性とサブタイプの構造機能相関を解明するために計画された。本年度は、(1)Caチャネルに対するATPおよび細胞質蛋白の作用を心筋細胞および神経細胞で比較検討すること、(2)ATPおよび細胞質蛋白の作用をより単純な系で検討するために、外来Caチャネル遺伝子を発現させた細胞系を確立すること、の2点について研究を進めた。まず心筋Caチャネルについては、牛心臓抽出液にATPを付加したものをinside-outパッチのCaチャネルに作用させると、チャネル活動の回復が確認された。このとき、ATPをADP、AMPまたは非水解性ATPアナログで置換するとチャネル回復作用は弱くなったものの消失しなかった。このことは、ATPの作用が加水分解を伴うものではなくサイトへの結合などによることを示唆している。神経細胞のCaチャネルの検討は培養DRG細胞で行った。パッチクランプによりL型およびN型のチャネルが認められ、inside-outパッチにより両チャネルのrundownが起こることが確認された。L型チャネルに注目してATPおよび細胞質蛋白の作用を検討すると、チャネルの活動が回復することが判明したがその作用は心筋Caチャネルよりは弱かった。また、チャネル遺伝子発現系についてはCHO細胞とBHK細胞にウサギ心筋Caチャネル遺伝子を発現させた細胞を入手し、実験の準備を進めている段階である。また、モルモット心筋Caチャネル遺伝子のクローニングを進めている。

This study aims to elucidate the structural and functional correlation between Ca, ATP, intracellular protein and protein regulation. This year, we will conduct a comparative study on (1) the role of ATP and cytoplasmic protein in Ca ~(2) in cardiac muscle cells and neurons,(2) the role of ATP and cytoplasmic protein in isolated cell lines, and (3) the development of exogenous Ca ~(2) in cell lines. The recovery of the Ca ~(2 +)-rich protein from the heart extract was confirmed by the addition of ATP to the inside-out Ca ~(2 +)-rich protein. ADP, AMP, ATP, ATP The effect of ATP on the hydrolysis of water is not obvious. The study of Ca ~(2 +) production in neurons and DRG cells in culture. The L-type and the N-type are identified by the inside-out. The role of ATP and cytoplasmic protein in L-type protein production was studied. The development of CHO cells and BHK cells is a process of preparation for the development of CHO cells and BHK cells. The heart of the heart of the