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ナタネのCDP-コリン合成酵素はオーキシンによる活性阻害を受けるか?

生长素是否抑制油菜CDP-胆碱合酶的活性？

基本信息

批准号：
08253204
负责人：
西田生郎
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ナタネ(Brassica napus L.cv Nohrinn 18)の種子を暗所24℃で2日間培養し発芽させた後、16時間のホモルクス光条件下で発芽実生の下胚軸の伸長を観察した。強光条件(100-116μmol m^<-2>s^<-1>)と弱光条件(33-45μmol m^<-2>s^<-1>)で生育させた(吸水後5.5日目)のナタネ発芽実生から、下胚軸の最上部1.2cmを切り取り、下胚軸よりRNAを単離した。RNA10μgを用い、CCT1およびCCT3に対するcDNAをプローブとしてノーザンハイブリダイゼーションを行った。CCT1をプローブとした場合、弱光条件と強光条件では、下胚軸のCCT1mRNAの蓄積レベルに違いが見られ、その相対比は、1:0.78であった。一方、CCT3をプローブとした場合でも、弱光条件と強光条件でのCCT3mRNAの蓄積レベルの比は1:0.62となり、CCT1の場合と同様の傾向を示した。以上の結果は、下胚軸の伸長速度の速い弱光条件下では、伸長速度の遅い強光条件に較べて、必然的により高いレベルのリン脂質合成がおこるに違いないという我々の考えを支持する。また、下胚軸伸長とリン脂質合成酵素遺伝子の発現調節が密接に連動していることを示したはじめての知見である。2.Price-JonesとHarwood(1983)は、オーキシンによって伸長が促進されるエンドウの第三節間の茎切片からCCT粗酵素抽出液を調製し、オーキシンがエンドウ細胞破砕液中のCCT酵素活性を阻害するという奇妙な結果を報告している。そこで、CCT1酵素(以下、CCT1pと略す)を過剰発現した大腸菌BL21(DE3)から調製した無細胞抽出液を陰イオン交換カラムクロマトグラフィ(HiTrap Q,Pharmacia)に供し、CCT1pを酵素比活性にして1,200倍まで精製した。この精製標品を用いて、CCT1pの活性を10μM 2.4-D存在下で測定したが、2.4.-DはCCT1pの活性を全く阻害しなかった。

1. Observation of hypocotyl elongation after germination of seeds of Brassica napus (L.cv Nohrinn 18) under dark conditions at 24℃ for 2 days and light conditions for 16 days. Under high light (100-116μmol m^<-2>s^<-1>) and low light (33-45μmol m^<-2>s^<-1>) conditions, the initial bud development, hypocotyl top 1.2 cm cutting and hypocotyl RNA isolation occurred at 5.5 days after water absorption. RNA 10 μg is used in the production of CCT1 and CCT3 CCT1 mRNA accumulation in hypocotyl under low light and high light conditions was 1:0.78. The ratio of CCT3 mRNA accumulation under low light conditions to high light conditions was 1:0.62, and the same tendency was observed under CCT1 conditions. These results support the study of hypocotyl elongation rate under low light conditions, and the study of hypocotyl elongation rate under high light conditions. The regulation of hypocotyl elongation and lipid synthase gene expression is closely linked. 2.Price-Jones and Harwood(1983) report wonderful results on the regulation and inhibition of CCT enzyme activity in CCT crude enzyme extract from stem sections between the third node and the third node. CCT1 enzyme (hereinafter referred to as CCT1p) was over-expressed in E. coli BL21 (DE3) and purified to 1,200-fold specific enzyme activity in cell-free extract. The activity of CCT 1p was determined in the presence of 10μM 2.4-D. D CCT1p activity is completely blocked.