植物の低温適応におけるホスファチジルコリンの生合成の役割に関する研究
磷脂酰胆碱生物合成在植物冷适应中的作用研究
基本信息
- 批准号:08640821
- 负责人:
- 金额:$ 1.41万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
- 财政年份:1996
- 资助国家:日本
- 起止时间:1996 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
1.ナタネ(Brassica napusL.cv Nohrinn 18)のCDP-コリン合成酵素CCT1(以下、CCT1pと略す)を過剰発現した大腸菌BL21(DE3)から調製した無細胞抽出液を陰イオン交換カラムクロマトグラフィ(HiTrap Q,Pharmacia)に供し、CCT1pを酵素比活性にして1,200倍まで精製した。CCT1pは、基質であるCTPとホスホコリンに対して、それぞれ、Km値0.19-0.24mMおよび0.43-0.52mMを示した。また、5mMジチオスレイトール(DTT)の存在下で活性が上昇した。また、DDTとともに、4μMチオレドキシンを共存させると活性はさらに上昇した。これらの結果は、まだ予備的ではあるが、植物のCCTが細胞内でSH基の酸化・還元により活性調節をうける可能性を示唆している。また、同様の知見は、すでに多くの研究がなされているホ乳類や酵母のCCTについては全く報告されていないことは注目に値する。2.CCT1のcDNAをTiプラスミドpAB35SGUSのGUS遺伝子部分と置換したプラスミドpAB_CCT1(カナマイシンおよびハイグロマイシン耐性遺伝子を選択マーカーにもつ)を作製した。pAB_CCT1をアグロバクテリウムC58rifRに導入し、これをもちいてin planta法によりシロイヌナズマを形質転換し、カナマイシンおよびハイグロマイシンに耐性を示す発芽実生を4個体単離した。今後は、これらの個体より、種子を採種し、薬剤耐性を確認した後、脂質及び耐凍性の試験を行う予定である。
1.ナタネ(Brassica napusL.cv Nohrinn 18) のCDP-コリン synthase CCT1 (hereinafter, CCT1pと小す) is a coliform BL 21(DE3) HiTrap prepared cell-free aspirated liquid yin イオン exchange カラムクロマトグラフィQ, Pharmacia) supplies and CCT1p enzyme has a specific activity of 1,200 times and is refined. CCT1pは, matrix であるCTP とホスホコリンに対して, それぞれ, Km value 0.19-0.24mM および0.43-0.52mM を Show した. The activity of また and 5mM ジチオスレイトール (DTT) increased in the presence of また.また, DDT とともに, 4μM チオレドキシンを coexistence させるとactivity はさらに Increase した. The result of これらの, the ではあるが prepared by まだ, and the acidification and reduction of SH group in the cell of plant CCT により activity regulation をうける possibility をshows the している.また, 同様の知见は, すでに多くの研究がなされているホmilk fermentation The mother's CCT report is the whole report and the focus is on it. 2. CCT1's cDNA を Ti DNA ス ミ ド pAB35SGUS のGUS そ subpart と replacement し た プ ラ ス ミ ドpAB_CCT1 (カナマイシンおよびハイグロマイシンresistant 伝子を选択マーカーにもつ)をproduced by した. pAB_CCT1をアグロバクテリウムC58rifRに Importし、これをもちいてin Planta Methodおよびハイグロマイシンにpatienceをshowsす発bud実生を4 individual single separationした. In the future, we will determine whether to collect individual seeds, confirm the tolerance to wormwood, and conduct tests on lipids and frost tolerance.
项目成果
期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
西田生郎: "Physiology,Biochemistry and Molecular Biology of Plant Lipids" Kluwer Academic Publisher(発表予定), (1997)
西田郁郎:《植物脂质的生理学、生物化学和分子生物学》Kluwer 学术出版社(待出版),(1997 年)
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