ADPリボシル化因子(ARF)の阻害による癌細胞増殖抑制の試み

尝试通过抑制 ADP-核糖基化因子 (ARF) 来抑制癌细胞生长

基本信息

  • 批准号:
    08266256
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.09万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    1996
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1996 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

癌細胞の増殖におけるADPリボシル化因子(ARF)-ホスフォリパーゼD(PLD)シグナルの意義を明らかにするために以下の検討を行った。1.細胞内ARFの発現:腫瘍細胞におけるARFの発現は、一次抗体として抗ARFモノクロナル抗体(Dr.R.A.Kahn Emory Univ.GA.USAより供与)を用いてウエスタンブロット法で検討した。ヒト腫瘍由来細胞株10種では発現量に差はあるものの全ての細胞にARFタンパクの発現を認めた。胃癌細胞由来細胞株の中で印環細胞癌および腺癌由来細胞の一部にARF発現の低下しているものがあった。2.PLD活性の測定:PLD活性の測定は、Brown et al.(Cell,75,1137-1144,1993)の方法に準じた。すなわち、細胞膜分画単独あるいは細胞膜、細胞質を可溶化しホスファチジルエタノールアミン(PE),4,5ホスファチジルビスホスフェート(PIP2)、ホスファチジルコリン(PC),の混合ミセル中で[3H]PCを基質として測定した。ミリスチン化リコンビナントARF1タンパクを調整し、PLD活性に及ぼす影響を検討した。HL60細胞におけるPLD活性を細胞膜に認め、同活性はSuMのARFおよび30uMのGTPγSの添加により約5倍に促進された。胃癌細胞株OCUM-1のPLD活性もまた、細胞膜のみでは活性が低かったが、5uM ARFおよび30uM GTPγSの添加により約2.5倍に刺激された。3.細胞増殖速度とPLD活性:HL60細胞をserum starvationにより増殖速度を変化させ、PLD活性を測定したところ、低濃度血清で培養した細胞のPLD活性は通常の血清濃度で培養した細胞の約70%に低下した。以上より癌細胞にはARF-PLDシグナルが存在し細胞増殖に関与している可能性が考えられた。今後ARF-PLDシグナルの阻害により細胞の増殖に与える影響を検討する予定である。この目的のためにARFの活性化を抑制するBrefeldin A処理および点変異arf遺伝子の導入が有力な手段と考えられる。
The significance of ADP expression in cancer cell proliferation is discussed below. 1. Detection of ARF in cells: The detection of ARF in tumor cells was detected using the primary antibody and the anti-ARF antibody (provided by Dr. R.A.Kahn Emory Univ.GA.USA). 10 cell lines from which the tumor originated were identified. A part of gastric cancer cell-derived cell line and adenocarcinoma cell-derived cell line showed low ARF. 2. Determination of PLD activity: Determination of PLD activity, Brown et al. (Cell, 75, 1137 - 1144, 1993). Cell membrane analysis: Cell membrane, cytoplasm solubilization (PE), 4,5-cell membrane solubilization (PIP2), cell membrane solubilization (PC), and mixed cell membrane solubilization (3H). ARF1 is a very important component of PLD. HL60 cells were stimulated by 5-fold increase in PLD activity by addition of 30uM of ARF and GTPγS. The PLD activity and membrane activity of gastric cancer cell line OCUM-1 were reduced by about 2.5 fold when 5uM ARF and 30uM GTPγS were added. 3. Cell proliferation rate and PLD activity: HL60 cells were cultured in serum and PLD activity was measured in low serum concentrations. PLD activity was usually about 70% lower in cultured cells. The possibility that ARF-PLD may exist in cancer cells is examined. Future ARF-PLD inhibition of cell proliferation and its impact on cell proliferation are discussed. The purpose of this study is to investigate the activation and inhibition of ARF by Brefeldin A treatment and the introduction of ARF genes.

项目成果

期刊论文数量(12)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Randazzo R.A.et al: "The amino terminus of ADP-ribosylation factor (ARF)1 is essential for interaction with Gs and ARF GTP ase-activating protein." J.Biol.Chem.269. 29490-29494 (1994)
Randazzo R.A. 等人:“ADP-核糖基化因子 (ARF)1 的氨基末端对于与 Gs 和 ARF GTP 酶激活蛋白的相互作用至关重要。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Sakamaki S.et al: "Long term survaival and differentiation of human poripheral blood CD34+cells in SCID mice." Int J Hematol.(in press).
Sakamaki S.et al:“SCID 小鼠中人外周血 CD34 细胞的长期存活和分化。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Kahn R.A.et al: "Mutationl analysis of Saccharomyces cerevisiae ARF1." J.Biol.Chem.270. 143-150 (1995)
Kahn R.A.等人:“酿酒酵母 ARF1 的突变分析。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Cavenagh M.M.et al: "ADP-ribosylation factor (ARF)-like 3,a new member of the ARF family of GTP-binding proteins cloned from human and rat tissues." J.Biol.Chem.269. 18937-18942 (1995)
Cavenagh M.M.等人:“ADP-核糖基化因子 (ARF) 样 3,是从人和大鼠组织中克隆的 GTP 结合蛋白 ARF 家族的新成员。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
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    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Terui T.et al: "Effect of Acid phospholipids on nucleotide exchange propeties of ADP-ribosylation factor I" J.Biol.Chem.269. 28130-28135 (1994)
Terui T.等人:“酸性磷脂对 ADP-核糖基化因子 I 的核苷酸交换特性的影响”J.Biol.Chem.269。
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  • 通讯作者:
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    14030075
  • 财政年份:
    2002
  • 资助金额:
    $ 1.09万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
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