浸透圧に対応するCl、水チャンネルとイノシトール輸送体の構造と機能の相関

Cl、水通道和肌醇转运蛋白的结构和功能与渗透压的关系

基本信息

批准号：
08268203
负责人：
田島陽太郎
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Akita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

研究計画に従って、plCln,ClC-k1,SMITの抗ペプチド抗体を検出手段として腎組織中のそれぞれのチャンネル、トランスポーターを分離精製を試みた.plCln:脳、肺、心筋、肝、腎の膜分画と可溶分画の双方にこのチャネル蛋白は存在していた.膜分画のplClnはミトコンドリアに局在することが明らかになった.plClnはバクテリアの細胞質にあって必要に応じて膜に出現するチャンネルporinと極めて類似した性質をもっている.ミトコンドリアが進化論的にバクテリア由来であるとすれば、porinと類似した動態によってミトコンドリア外膜にチャンネル機能を発揮しているであろう.当然ミトコンドリアの内膜と外膜の間の浸透圧、Cl濃度の調節に機能しているものと推定される.SMIT:ミトコンドリアと細胞表面膜に存在する分子の大きさは著しく異なっていた.細胞表面膜のものは57-kDa、ミトコンドリアのものは66-kDaで、cDNAからの推定値79.5-kDaより著しく小さい.表面膜の20-kDa分の不足分は用いた抗体に対するエピトープからN-末端部分の欠失と推定され、その部分はNa-認識部位と推定されている部分と2-3の膜貫通部分に相当する.SMIT分子のNaに依存したイノシトールの分子レベル輸送機構を本質的に見直す必要が示された.ミトコンドリアに存在することは、ミトコンドリアの浸透圧維持とイノシトール代謝との関係しているものと予想される.ClC-k1:用いた抗ペプチド抗体は意外にもこのチャンネル蛋白ではなく、新しい腎固有の2種の蛋白であった.その精製に成功した.

根据研究计划，我们尝试使用PLCLN，CLC-K1的抗肽抗体和SMIT作为检测方法将肾脏组织中的每个通道和转运蛋白分离。发现膜级分中的PLCLN定位于线粒体。 PLCLN具有与孔林通道非常相似的特性，孔蛋白在细菌的细胞质中必要时出现在膜中。如果线粒体是从细菌进化得出的，则由于与PORIN相似的动力学，线粒体外膜中的通道功能很可能。自然假定它可以调节线粒体内膜和外膜之间的渗透压和Cl浓度。 SMIT：线粒体在LIA和细胞表面膜中存在的分子大小显着差异。细胞表面膜为57 kDa，线粒体膜为66 kDa，其明显小于cDNA的79.5 kDa估计值。估计表面膜的20 kDa缺乏是从表位到所使用的抗体的N末端部分的缺失，该部分对应于估计的Na识别位点和2-3个跨膜部分。结果表明，基本上需要回顾SMIT分子中肌醇的分子水平转运机理。预计线粒体的存在与维持渗透压和肌瘤代谢有关。 CLC-K1使用的抗肽抗体：令人惊讶的不是这种通道蛋白，而是两种新的肾脏特异性蛋白。纯化成功了。