腎における水とCl^-チャンネル及びイノシトール輸送体の局在と相関

肾脏中水和 Cl^- 通道以及肌醇转运蛋白的定位和相关性

基本信息

批准号：
08671270
负责人：
田島陽太郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Akita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

研究計画に従って、plCln,ClC-k1,SMITの抗ペプチド抗体を検出手段として腎組織中のそれぞれのチャンネル、トランスポーターを分離精製を試みた.plCln:膜分画と可溶分画の双方にこのチャンネル蛋白は存在し、膜分画のものはミトコンドリアに存在することが明らかになった.plClnはバクテリアのporinと極めて類似した性質があり、ミトコンドリアが進化論的にバクテリア由来であるとすれば、porinと類似した動態によってミトコンドリア外膜にチャンネル機能を発揮するであろう.ClC-k1:抗体が認識した腎可溶分画中に存在する蛋白2種の精製に成功した.その純化標品についてペプチド・シーケンスを行ったところ、この2種の蛋白は共に未知のものであって、1つはaminoacylaseのアミノ酸配列と1部同じであったが、サブユニット構造も分子量も異なる分子であった.他の1つはλ-crystallinと73%のホモロジーのある蛋白で、分子量、サブユニット構造もλ-crystallinとほぼ同じであった.注目すべきことは、共に腎固有の蛋白分子で他の臓器には存在しない.SMIT:ミトコンドリアと細胞表面膜に存在する分子の大きさは著しく異なり、細胞表面膜のものはcDNAから推定されたものより約20-kDa小さい.この不足分がN-末端であるとすれば、Na-認識部位と推定されている部分の欠失を意味する.以上の結果を要約すると、(1)腎固有の蛋白を2種を発見した.(2)plClnとSMIT蛋白分子は主にミトコンドリアに存在した.(3)細胞表面膜に存在するSMIT蛋白分子は、cDNAからの推定値より20-kDa余小さく輸送分子機構の解析を見直す必要性を示した.

根据研究计划，我们尝试使用PLCLN，CLC-K1的抗肽抗体和SMIT作为检测手段，将肾脏组织中的每个通道和转运蛋白分离并净化。 PLCLN：该通道蛋白均存在于膜和可溶性部分中，并且在线粒体中发现膜级分存在。 PLCLN具有与细菌孔蛋白的非常相似的特性，如果线粒体进化源自细菌，则由于与孔蛋白类似的动力学，它会在线粒体外膜中发挥通道功能。 CLC-K1：抗体成功纯化了肾溶解部分中的两种蛋白质。当我们在纯化的制剂上进行肽序列时，这两种蛋白质都是未知的，其中一部分与氨基酰基酶的氨基酸序列相同，但使用了亚基。分子的结构和分子量不同。另一种是具有λ-晶状体蛋白同源物为73％的蛋白质，其分子量和亚基结构与λ-晶状蛋白大致相同。值得注意的是，两者都是特有的蛋白质分子，并且在其他器官中不存在。 SMIT：线粒体和细胞表面膜中存在的分子的大小显着差异，其细胞表面膜的大小约为2。 0-kda小。如果这种缺陷处于N末端，则意味着删除假定的NA识别位点。为了总结上述结果，（1）我们发现了两种类型的肾脏特异性蛋白质。（2）PLCLN和SMIT蛋白分子主要存在于线粒体中。（3）存在于细胞表面膜上的SMIT蛋白分子比cDNA的估计值少20 kDa或小，我们表明我们需要审查转运分子机制的分析。