ヒト癌細胞におけるRBとp53の相互作用及びその細胞周期調節機構の比較解析

人类癌细胞中RB与p53相互作用及其细胞周期调控机制的比较分析

• 批准号: 09254230
• 负责人: 高橋 玲
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09254230/
• 关键词: 癌抑制遺伝子; 細胞周期; 遺伝子導入; RB; p53; アポトーシス

(1)ヒト癌細胞にRB and/or p53の組み合わせで安定性導入した株について、それぞれの遺伝子の活性化の 程度を経時的かつ定量的に測定するシステムを検討した。7つの細胞株にRBあるいはp53遺伝子を再構築したパネルの中で、DNA損傷によりG1停止とアポトーシスに関連した表現型の変化を示すものが明らかになってきている。具体的には、膀胱癌(HTB9)、口腔癌(KOSC3)、骨肉腫(Saos-2)、線維肉腫(Hs913T),大腸癌(WiDr)において、G1停止とアポトーシスの誘導に関する変化が著明に認められた。この中で、RBとp53の両者の遺伝子導入が終了していないものについては、さらに、安定性導入実験を継続する。導入遺伝子発現の誘導可能なプラスミドで追加導入株を得た。HTB9はRB(-)p53(-)であり、それぞれの遺伝子を再構築したクローンが得られている。(2)G1停止とアポトーシスの評価についてはFACSと形態学的解析およびレーザスキヤニングサイトメータで行った。特に後者では単細胞レベルでの細胞周期と形態学的変化を評価した。p53の発現量はNorthemプロットと定量的RT-PCRを併用し、RBについてはWestemプロットでリン酸化の程度を含めて発現量を評価した。RBが活性化されてG1停止を起こす場合には、むしろp53依存性アポトーシスにはなりにくいことが明らかとなってきた。またRBが不活化されている細胞では、p533の発現亢進が十分に強ければアポトーシス誘導に至る。(3)上記RB(+)の細胞については、G1ブロックをした場合にアポトーシスが回避できるが、この際にp53特異的 反応経路の活性化が変化するかどうかを調べた。すなわち、RBに非依存性に働くことを検証するために上記クローンについて同様に発現レベルを解析をした。

(1)The expression of RB and/or p53 in human cancer cells was investigated by quantitative analysis of the expression of RB and/or p53. 7. Cell lines with p53 genes are re-constructed, DNA damage is detected, and phenotypic changes are detected. Specifically, bladder cancer (HTB9), oral cancer (KOSC3), osteoma (Saos-2), linear osteoma (Hs913T), colorectal cancer (WiDr), G1 stop, and induction are identified. The introduction of this gene into the medium, RB and p53 is complete, and the introduction of stability into the medium is complete. The induction of the expression of the introduced gene may result in the addition of the introduced strain. HTB9 RB(-)p53(-) (2)G1 The analysis of FACS morphology was carried out in the following ways: In particular, cell cycle and morphological changes in the cell cycle were evaluated. p53 expression was evaluated by quantitative RT-PCR and Western blot analysis. RB activation G1 starts when p53 dependency is lost. The expression of p533 in cells that are not activated by RB is very strong and the expression of p533 is induced by RB. (3)Note above that RB(+) cells are activated, G1 cells are activated, G1 cells are activated, and p53-specific reverse pathways are activated. For example, if you want to find out more, you can find out more about it.

项目成果

R.Takahashi et al: "Transfection of wild-type p53 induces differentiation in human gingival carcinoma cells" Eur.J.Cancer. 32A(3). 533-539 (1996)

R.Takahashi 等人：“野生型 p53 的转染诱导人牙龈癌细胞分化”Eur.J.Cancer。

M.Fujita et al: "Alternative splicing of the erythropoietin receptor gene correlates with erythroid differentiation in rat hematopoietic and leukemic cells." Cancer Letters. 112. 47-55 (1997)

M.Fujita 等人：“促红细胞生成素受体基因的选择性剪接与大鼠造血细胞和白血病细胞的红系分化相关。”

P.Valente et al: "Transfection of the RB oncosuppressor gene into metastatic melanoma cells suggests a role for RB in control of tumor progression" Oncogene. 13. 1169-1178 (1996)

P.Valente 等人：“将 RB 抑癌基因转染至转移性黑色素瘤细胞表明 RB 在控制肿瘤进展中发挥作用”Oncogene。

F.Ashoori et al: "Possible contributions of mastocytosis,spoptosis,and hydrolysis in pathophysiology of randomized skin flaps in human and guinea pig" Plastic Reconstr Surg.98(3). 491-501 (1996)

F.Ashori 等人：“肥大细胞增多症、细胞凋亡和水解在人类和豚鼠随机皮瓣病理生理学中的可能贡献”Plastic Reconstr Surg.98(3)。

H.Kinoshita et al: "Contribution of chromosome 9p21-22 deletion to the progression of human renal cell carcinoma." J.J.C.R.86. 795-799 (1995)

H.Kinoshita 等人：“染色体 9p21-22 缺失对人类肾细胞癌进展的贡献。”