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多犯性植物病原菌類の侵入器官分化とその環境応答分子機構

多基因植物病原真菌侵入器官分化及其环境响应分子机制

基本信息

批准号：
13039005
负责人：
阿久津克己
金额：
$ 3.52万
依托单位：
Ibaraki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

B.cinereaの分生胞子をプラスチックシャーレ上で1/2PDB培地を用いて静置培養することにより、植物体表面と同様に付着器を形成することが明らかとなった。そこで、胞子懸濁液をシャーレ上で12時間静置培養し、付着器を形成した菌体から粗タンパク質を抽出した。対照として、胞子懸濁液を振とう培養して得られた菌体からも同様に粗タンパク質を抽出した。両タンパク質を二次元電気泳動に供試したところ、両者の検出タンパク質スポットに差異が見られた。これらについて画像解析ソフトimagemaster 2D-Eliteを用いて解析した結果、静置培養サンプルからは470スポット、振とう培養サンプルからは528スポットが検出された。両者のマッチング解析によって、付着器形成時に特異的に見られる26個のスポットを検出した。B.cinereaのGタンパク質αサブユニット(Gα)をコードする遺伝子の付着器形成への関与を明らかにするために、Gα遺伝子のクローニングを行った。まず、糸状菌(11種)のGα_i遺伝子および比較的下等な真核生物(5種)のGα_s、遺伝子において共通に保存されたアミノ酸配列をモチーフとしてdegenerateプライマーを設計し、本菌におけるこれら遺伝子の増幅を試みた。その結果、既報のbcg1(Gα_i[菌類サブグループI])とbcg2(菌類サブグループII)にそれぞれ高い相同性を示すクローンが得られた。次に、菌類サブグループIIIに属するGα遺伝子を単離するために、菌類(8種)のGα_s、(菌類サブグループIII)遺伝子のアミノ酸コンセンサス配列からdegenerateプライマーを設計し、本菌におけるこの遺伝子の増幅を試みた。得られた部分塩基配列は明らかにbcg1およびbcg2と異なるものであり、菌類サブグループIIIに属するM.griseaのMAGA等のホモログであることが確認された。本遺伝子の全長を単離して塩基配列を決定したところ、近縁種であるS.sclerotiorumの菌類サブグループIII遺伝子、spg1とヌクレオチドレベルで約90%の相同性が明らかとなった。

B.Cinerea merisporites are cultured in static culture with 1/2PDB, and the surface of the plant and the same receptor are formed. The spore suspension was incubated for 12 hours, and the carrier was formed. For example, if the cell suspension is irradiated, the cell suspension will be extracted. The difference between the quality of the sample and the quality of the sample can be seen. The image analysis software imagemaster 2D-Elite is used to analyze the results, static culture, vibration and culture. The analysis of the structure and the formation of the substrate are based on 26 different structures. B.Cinerea's G α-quality Gα-quality The G α_i genes of 11 species of bacteria and 5 species of lower eukaryotes were commonly preserved and their DNA sequences were designed to increase the amplitude of Gα_i genes. The results showed that bcg1(Gα_i[fungus support group I]) and bcg2(fungus support group II) had high identity. In addition, Gα gene of fungi (8 species), Gα gene of fungi (8 species), G α gene of fungi (3 species), Gα gene of fungi (8 species), G α gene of fungi (3 species), G α gene of fungi (4 species), G α gene of fungi (3 species), G α gene of fungi (3 species), G α gene of fungi (4 species), G α gene of fungi (3 species), G α gene of fungi (4 species), G α gene of fungi (8 species), G α gene of fungi (3 species), G α gene of fungi (4 species), G α gene of fungi (3 species), G α gene of fungi (4 species), G α gene of fungi (3 species), G α gene of fungi (4 species), G α gene of fungi (3 species), G α gene of fungi (4 species), G α gene of fungi (4 The results show that BCG1 and BCG2 are different from each other, and BCG 3 and BCG 3 are different from each other. The total length of the fungus is about 90% identical to that of S.sclerotiorum, which is closely related to the gene sequence.