異常蛋白質が引き起こす空胞形成の分子解析

异常蛋白质引起的空泡形成的分子分析

• 批准号: 14037232
• 负责人: 堀 清次
• 金额: $ 51.01万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14037232/
• 关键词: ポリグルタミン; VCP; p97; AAA ATPase; フォルディング; 腺ガン; 出芽酵母; polyglutamine; CFTR; ER stress; ubiquitin; Lewy body; parkinson's disease; Alzheimer's disease

(1)VCP及びそのコファクター類の組織分布を免疫組織染色により解析した。マウスでは、管腔構造をとる上皮系の細胞や免疫系細胞、乳腺上皮細胞、胃酸分泌細胞などの分泌機能をもつ細胞で、VCPの強い発現が見られた。ヒト組織でも上皮系の細胞に強い発現が見られ、脂肪肝に伴う細胞内油滴およびMallory bodyの形成部位でも顕著な発現が検出された。また、ヒトがん組織では上皮系の形態をとる細胞で強く発現していた。これらの結果から、VCPはタンパク質や酸などの分泌でも重要な役割を果たしていることが示唆された。(2)HeLa細胞のVCPを5%未満に低下させるsiRNAを作成した。この系にsiRNAの標的とはならないようにデザインした変異体を再導入してタンパク質を置換する普遍的手法を確立し、次の2つの系でVCPあるいはその修飾型が重要な役割を果たしていることを見出した。(2)-1 HeLa細胞ではVCPのノックダウンにより紡錘体極の数が不安定になり、M期で細胞周期が停止もしくは細胞死に至った。野生型VCPの導入で細胞の増殖は回復し、特定部位のリン酸化を模倣する変異体の導入では増殖が更に活性化した。抗体による染色から、このリン酸化VCPは紡錘体極やセントロソームでタンパク質の会合と分離に寄与していることが示唆された。(2)-2 培養細胞に発現させたルシフェラーゼを熱ショックにより変性させると、VCPのノックダウン細胞では活性の回復が遅れた。野生型の導入では活性は回復したが、D1領域のATPase欠失変異体では回復が見られなかった。変性蛋白質の機能回復におけるD1領域ATPase活性の重要性が明らかとなった。(3)VCPが関与する信号伝達経路を解明するため、VCPの発現に依存して生育する温度感受性株を得た。ゲノムライブラリーのスクリーニングにより、温度感受性を回復させる8つの遺伝子断片を得た。

(1) Distribution of VCP and びそ コファ <s:1> タ タ タ タ <s:1> tissues を staining of immune tissues によ analysis of た た. マ ウ ス で は, lumen structure を と る epithelial cell の や immune system cells, breast epithelial cells, gastric acid secretion な ど の secretion function を も つ cell で, VCP の strong い 発 が now see ら れ た. ヒ ト organization で も epithelial cell の に strong い 発 が now see ら れ oil and fatty liver に う cell お よ び Mallory body の forming parts で も 顕 the な 発 now が 検 out さ れ た. Youdaoplaceholder0, ヒトがん tissue で て epithelial line <s:1> morphology をとる cells で strongly く show て て た た た た た. こ れ ら の results か ら, VCP は タ ン パ ク qualitative や acid な ど の secretion で も important な "を cut fruit た し て い る こ と が in stopping さ れ た. (2) In HeLa cells, <s:1> VCPを5% is unfilled に and the させるsiRNAを is subdivided to form <s:1> た. こ の is に siRNA の mark と は な ら な い よ う に デ ザ イ ン し た - variant を to import し て タ ン パ ク qualitative を replacement す る common gimmick を established し, の 2 つ の is で VCP あ る い は そ の modify important な が "を cut fruit た し て い る こ と を shows し た. (2) - 1 HeLa で は VCP の ノ ッ ク ダ ウ ン に よ り spindle pole number の が unrest に な り, M phase で cell cycle が stop も し く は に cell death to っ た. Wild type VCP の import で cell は reply し の raised colonization, certain parts の リ ン acidification を imitate す る - variant の import で は raised colonization が more に activeness し た. Antibody に よ る dyeing か ら, こ の リ ン acidification VCP は spindle pole や セ ン ト ロ ソ ー ム で タ ン パ ク quality meet の と に send from し て い る こ と が in stopping さ れ た. (2) - 2 culture cell に 発 now さ せ た ル シ フ ェ ラ ー ゼ を hot シ ョ ッ ク に よ り - sex さ せ る と, VCP の ノ ッ ク ダ ウ ン cells で は active reply の が 遅 れ た. Wild-type <s:1> introduction で <s:1> activity <e:1> is restored to たが たが, and D1 domain <s:1> ATPase undervariant で is restored to が. See られな った った った. The <s:1> functional restoration of variable proteins and the <s:1> importance of ATPase activity in the におけるD1 domain が is obvious ら となった となった. (3) the VCP が masato and す 伝 る signal of 経 road を interpret す る た め, VCP の 発 に now dependent し て fertility す る temperature sensitivity strains を た. ゲ ノ ム ラ イ ブ ラ リ ー の ス ク リ ー ニ ン グ に よ り, temperature sensibility を reply さ せ る 8 つ の 伝 son を must た fragment.

项目成果

The role of pre-existing aggregates in Hsp104-dependent polyglutamine aggregate formation and epigenetic change of yeast prions

• DOI: 10.1111/j.1356-9597.2004.00759.x
• 发表时间: 2004-08-01
• 期刊: GENES TO CELLS
• 影响因子: 2.1
• 作者: Kimura, Y;Koitabashi, S;Fujita, T
• 通讯作者: Fujita, T

Nishitoh, H., Matsuzawa, A., Tobiume, K., Saegusa, K., Takeda, K., Inoue, K., Hori, S., Kakizuka, A., Ichijo, H.: "ASK1 is essential for endoplasmic reticulum stress-induced neuronal cell death triggered by expanded polyglutamine repeats"Genes and Dev.. 1

Nishitoh, H.、Matsuzawa, A.、Tobiume, K.、Saegusa, K.、Takeda, K.、Inoue, K.、Hori, S.、Kakizuka, A.、Ichijo, H.：“ASK1 对于

Effective treatment of advanced solid tumors by the combination of arsenic trioxide and L-buthionine-sulfoximine

• DOI: 10.1038/sj.cdd.4401389
• 发表时间: 2004-07-01
• 期刊: CELL DEATH AND DIFFERENTIATION
• 影响因子: 12.4
• 作者: Maeda, H;Hori, S;Kakizuka, A
• 通讯作者: Kakizuka, A

Physical and functional interaction between dorfin and valosin-containing protein that are colocalized in ubiuitylated inclusions in neurodegenerative disorders.

多芬和含缬洛辛的蛋白质之间的物理和功能相互作用，这些蛋白质共定位于神经退行性疾病的泛素化包涵体中。

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.biol.Chem. 279
• 作者: Ishigaki;S.;et al.
• 通讯作者: et al.

Kobayashi T., Tanaka K., Inoue K., Kakizuka A.: "Functional ATPase activity of p97/valosin-containing protein (VCP) is required for the quality control of endoplasmic reticulum in neuronally differentiated mammalian PC12 cells"J Biol Chem.. 277. 47358-473

Kobayashi T.、Tanaka K.、Inoue K.、Kakizuka A.：“p97/valosin 含蛋白 (VCP) 的功能性 ATP 酶活性对于神经分化哺乳动物 PC12 细胞内质网的质量控制是必需的”J Biol Chem。