权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

シナプス膜上AMPA型グルタミン酸受容体数とサブユニット構成の定量的動態解析

突触膜AMPA型谷氨酸受体数量和亚基组成的定量动态分析

基本信息

批准号：
16015325
负责人：
深澤有吾
金额：
$ 3.33万
依托单位：
National Institute for Physiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16015325/
关键词：
ニューロン神経可塑性グルタミン酸受容体電子顕微鏡海馬

项目摘要

神経細胞膜上の分子局在の解析には電子顕微鏡レベルの観察が必要だが、従来法のpre-embedding法や、post-embedding法では、細胞膜上の分子と細胞質中の分子を見分けることは出来ず感度も低く定量性に欠けるため、シナプス機能を分子レベルで定量的に理解する事は不可能であった。そこで、細胞膜上の分子局在を電子顕微鏡レベルで2次元的に定量的に解析できるSDS処理凍結割断レプリカ免疫標識法(SDS-FRL法)を脳組織に適用し、電子顕微鏡レベルで細胞膜上のAMPA型グルタミン酸受容体(AMPA受容体)の局在を定量的に解析できるよう最適化し、1)歯状回分子層におけるAMPA受容体の局在様式、2)サイレントシナプス(NMDA受容体を発現しAMPA受容体を発現していない神経伝達に直接関与しないシナプス)の有無、3)LTP誘導後のAMPA受容体の動態変化を解析した。その結果、1)歯状回分子層中のAMPA受容体のシナプス外AMPA受容体密度が高いこと(シナプス内外の平均密度比=5:1〜10:1)、顆粒細胞樹状突起の遠位でシナプス外AMPA受容体がより多くの局在していること、シナプスにおける密度には領域差がないことを明らかにし、また、2)CA1領域の全てのシナプスにAMPA受容体が発現している結果を明らかにし、サイレントシナプスは既存法の低感度がもたらしたアーチファクトであることを示唆した。更に、3)LTP誘導実験によりAMPA受容体密度の低いシナプスがLTP誘導により増強されることを示唆する結果を得た。

The molecular structure on the cell membrane of the brain is analyzed by electron microscopy, pre-embedding method and post-embedding method. The molecular structure on the cell membrane is analyzed by low sensitivity, quantitative analysis and quantitative analysis. The molecular structure on the cell membrane was analyzed quantitatively by electron microscopy and SDS treatment.(SDS-FRL method):(1) Quantitative analysis of AMPA-type acid receptor (AMPA receptor) on cell membrane by electron microscopy;(2) Optimization of AMPA receptor structure in dentate molecular layer; 2) the presence or absence of NMDA receptor expression and AMPA receptor expression; 3) the analysis of dynamic AMPA receptor expression after LTP induction. The results are as follows: 1) the AMPA receptor density outside the dentate molecular layer is high (the average density ratio between inside and outside the dentate molecular layer is 5:1 ~ 10:1), the AMPA receptor outside the dentate molecular layer is remote from the dendritic process of granular cells, and the AMPA receptor outside the dentate molecular layer is multi-site. Furthermore, 3)LTP induction results in low AMPA receptor density and high LTP induction results.